[发明专利]无乳链球菌毒力基因的三连七重PCR检测引物组、试剂盒及检测方法

摘要

本发明公开了一种无乳链球菌毒力基因的三连七重PCR检测引物组，包括毒力基因sip、fbsA、hylB、cfb、sodA、DltR、cspA、ponA、bibA、srr‑1、bca、iagA、scpB、fbsB、pavA、psaA、spb1、bac、cppA、lmb和cylE对应的PCR扩增引物对。各引物序列如序列表所示。本发明还公开了包含上述引物组的试剂盒以及应用上述引物组的无乳链球菌毒力基因的三连七重PCR检测方法。所述检测方法以sip、fbsA、hylB、cfb、sodA、DltR和cspA为第一组，ponA、bibA、srr‑1、bca、iagA、scpB和fbsB为第二组，pavA、psaA、spb1、bac、cppA、lmb和cylE为第三组，同时在同一反应条件下进行PCR反应，同时扩增21个毒力基因目的片段的靶序列，可根据检测结果确定样品是否为无乳链球菌，确定无乳链球菌宿主来源以及分型，评价菌株毒力基因谱型的变异。

主权项

1.一种无乳链球菌毒力基因的三连七重PCR检测引物组，其特征是，包括毒力基因sip、fbsA、hylB、cfb、sodA、DltR、cspA、ponA、bibA、srr‑1、bca、iagA、scpB、fbsB、pavA、psaA、spb1、bac、cppA、lmb和cylE对应的PCR扩增引物对，所述的PCR扩增引物对为：(1)所述sip的PCR扩增引物对：包括SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列的引物sip‑F和SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列所示的引物sip‑R；(2)所述fbsA的PCR扩增引物对：包括SEQ ID NO.3所示的核苷酸序列的引物fbsA‑F和SEQ ID NO.4所示的核苷酸序列的引物fbsA‑R；(3)所述hylB的PCR扩增引物对：包括SEQ ID NO.5所示的核苷酸序列的引物hylB‑F和SEQ ID NO.6所示的核苷酸序列的引物hylB‑R；(4)所述cfb的PCR扩增引物对：包括SEQ ID NO.7所示的核苷酸序列的引物cfb‑F和SEQ ID NO.8所示的核苷酸序列的引物cfb‑R；(5)所述sodA的PCR扩增引物对：包括SEQ ID NO.9所示的核苷酸序列的引物sodA‑F和SEQ ID NO.10所示的核苷酸序列的引物sodA‑R；(6)所述DltR的PCR扩增引物对：包括SEQ ID NO.11所示的核苷酸序列的引物DltR‑F和SEQ ID NO.12所示的核苷酸序列的引物DltR‑R；(7)所述cspA的PCR扩增引物对：包括SEQ ID NO.13所示的核苷酸序列的引物cspA‑F和SEQ ID NO.14所示的核苷酸序列的引物cspA‑R；(8)所述ponA的PCR扩增引物对：包括SEQ ID NO.15所示的核苷酸序列的引物ponA‑F和SEQ ID NO.16所示的核苷酸序列的引物ponA‑R；(9)所述bibA的PCR扩增引物对：包括SEQ ID NO.17所示的核苷酸序列的引物bibA‑F和SEQ ID NO.18所示的核苷酸序列的引物bibA‑R；(10)所述srr‑1的PCR扩增引物对：包括SEQ ID NO.19所示的核苷酸序列的引物srr‑1‑F和SEQ ID NO.20所示的核苷酸序列的引物srr‑1‑R；(11)所述bca的PCR扩增引物对：包括SEQ ID NO.21所示的核苷酸序列的引物bca‑F和SEQ ID NO.22所示的核苷酸序列的引物bca‑R；(12)所述iagA的PCR扩增引物对：包括SEQ ID NO.23所示的核苷酸序列的引物iagA‑F和SEQ ID NO.24所示的核苷酸序列的引物iagA‑R；(13)所述scpB的PCR扩增引物对：包括SEQ ID NO.25所示的核苷酸序列的引物scpB‑F和SEQ ID NO.26所示的核苷酸序列的引物scpB‑R；(14)所述fbsB的PCR扩增引物对：包括SEQ ID NO.27所示的核苷酸序列的引物fbsB‑F和SEQ ID NO.28所示的核苷酸序列的引物fbsB‑R；(15)所述pavA的PCR扩增引物对：包括SEQ ID NO.29所示的核苷酸序列的引物pavA‑F和SEQ ID NO.30所示的核苷酸序列的引物pavA‑R；(16)所述psaA的PCR扩增引物对：包括SEQ ID NO.31所示的核苷酸序列的引物psaA‑F和SEQ ID NO.32所示的核苷酸序列的引物psaA‑R；(17)所述spb1的PCR扩增引物：包括SEQ ID NO.33所示的核苷酸序列的引物spb1‑F和SEQ ID NO.34所示的核苷酸序列的引物spb1‑R；(18)所述bac的PCR扩增引物对：包括SEQ ID NO.35所示的核苷酸序列的引物bac‑F和SEQ ID NO.36所示的核苷酸序列的引物bac‑R；(19)所述cppA的PCR扩增引物对：包括SEQ ID NO.37所示的核苷酸序列的引物cppA‑F和SEQ ID NO.38所示的核苷酸序列的引物cppA‑R；(20)所述lmb的PCR扩增引物对：包括SEQ ID NO.39所示的核苷酸序列的引物lmb‑F和SEQ ID NO.40所示的核苷酸序列的引物lmb‑R；(21)所述cylE的PCR扩增引物对：包括SEQ ID NO.41所示的核苷酸序列的引物cylE‑F和SEQ ID NO.42所示的核苷酸序列的引物cylE‑R。