[发明专利]猪圆环病毒3型病毒样颗粒的制备方法及其应用

摘要

本发明属于基因工程疫苗领域，公开了猪圆环病毒3型病毒样颗粒的制备方法及其应用，本发明首次建立了PCV3病毒样颗粒的制备方法，本发明以优化后的猪圆环病毒3型CAP蛋白为目的蛋白，使用的原核表达系统和自建的蛋白自组装缓冲液体系，成功构建了猪圆环病毒3型病毒样颗粒，使抗原的生产变得容易，成本低廉而且产量高。构建出的病毒样颗粒免疫仔猪后，能快速产生针对3型猪圆环病毒的抗体，具有广泛的应用价值。

主权项

1.猪圆环病毒3型病毒样颗粒的制备方法，包括下述步骤：1）以f：5'‑TATGGATCCACCGCGGGTACCTACTACACCA‑3'和r：5'‑GCGGCAAGCTTTTACAGAACGCTTTTGTAACGA‑3'为上下游引物，以合成的PCV3‑cap181为模板进行扩增；扩增产物和pET28a‑SUMO经BamH I 和Hind III双酶切后回收、连接，产物转化到E.coli DH5ɑ感受态细胞，挑菌鉴定后抽提质粒，重组质粒命名为pET28a‑8his×SUMO‑cap181;所述的PCV3‑cap181基因的核苷酸序列为SEQ ID NO. 1所示;2）将pET28a‑8his×SUMO‑cap181质粒转入大肠杆菌表达菌株Rosetta(DE3)，命名为Rcap181;3）Rcap181菌液接种到含卡那霉素的液体LB培养基中，37℃，200rpm摇床上培养3~4 h，使OD600的值达到0.6;然后加入终浓度为0.1 mmol/L的IPTG，37℃，200rpm进行诱导表达3~4小时，随后离心收集菌液；4）破碎3）中收集的菌液的菌体，收集上清后过柱纯化，将初纯蛋白放入透析袋中透析后，切除SUMO标签，即得CAP蛋白；5）CAP蛋白置于缓冲液A中透析12~24 h;透析完成后，即得猪圆环病毒3型病毒样颗粒；所述的缓冲液A 的配方： 0.1 M 磷酸氢二钠、0.1 M 磷酸二氢钠、500 mM氯化钠、10 mMTris、50 mM氯化钾、2 mM氯化镁、5%的甘油、pH6.5。