[发明专利]高效快速获取植物RNA病毒末端序列的RACE方法在审
| 申请号： | 201810425892.8 | 申请日： | 2018-05-07 |
| 公开（公告）号： | CN108624587A | 公开（公告）日： | 2018-10-09 |
| 发明（设计）人： | 曹孟籍;田欣;周常勇 | 申请（专利权）人： | 西南大学 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 重庆市前沿专利事务所(普通合伙) 50211 | 代理人： | 邹晓艳 |
| 地址： | 400715*** | 国省代码： | 重庆;50 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种高效快速获取植物RNA病毒末端序列的RACE方法，步骤：1)感染目标病毒的植物的总RNA抽提；2)对提取的总RNA加Poly(A)尾；3)对加Poly(A)尾的RNA进行提纯；4)一步法RT‑PCR：将加Poly(A)尾提纯后的总核酸作为模板，上游通用引物为M4Tm，设计目标病毒的特异性下游引物GSP1，利用引物M4Tm和GSP1进行扩增；对RT‑PCR的扩增产物进行纯化、连接、转化和克隆验证。本发明直接在正负义链的3’序列末端加上Poly(A)尾巴，通过常规一步法RT‑PCR或者进一步的巢式PCR即可获得末端序列，5’和3’末端无区别操作，步骤简单。 | ||
| 搜索关键词： | 末端序列 植物RNA病毒 高效快速 一步法 提纯 上游通用引物 病毒 总RNA抽提 感染目标 扩增产物 设计目标 下游引物 序列末端 巢式PCR 总核酸 总RNA 扩增 引物 尾巴 克隆 验证 转化 | ||
【主权项】：
1.一种高效快速获取植物RNA病毒末端序列的RACE方法，其特征在于，包括如下步骤：1)感染目标病毒的植物的总RNA抽提；2)对提取的总RNA加Poly(A)尾；3)对加Poly(A)尾的RNA进行提纯；4)一步法RT‑PCR：将加Poly(A)尾提纯后的总核酸作为模板，上游通用引物为M4Tm，使用软件设计目标病毒的特异性下游引物GSP1，利用引物M4Tm和GSP1进行扩增，M4Tm序列如SEQ ID NO:33所示；对RT‑PCR的扩增产物进行纯化、连接、转化和克隆验证。
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