[发明专利]一种平阴玫瑰细胞液的体外美白功效评价方法

摘要

一种平阴玫瑰细胞液的体外美白功效评价方法，将平阴玫瑰细胞液溶于10%FBS/无酚红DMEM中，玫瑰细胞液浓度分组，用10%FBS/无酚红DMEM培养液培养小鼠源B16F10黑色素瘤细胞，置于离心管中，接种，待细胞贴壁，清洗，之后置于冰上，清洗后每孔加入Triton X‑100裂解，将裂解完的细胞收集至冰EP管中离心，离心结束取上清转移至冰好的EP管，BCA进行蛋白定量，定量结束50μg蛋白+PBS+10μl 10mM L‑DOPA=100μl置于每孔，将孔板置于烘箱475nm下读OD值。本发明可由分光光度法检测获得的酪氨酸酶活性测定方法来验证玫瑰细胞液的美白功效检测效果。

主权项

1.一种平阴玫瑰细胞液的体外美白功效评价方法，其特征在于包括如下步骤:1）将平阴玫瑰细胞液溶于培养液中，所述的培养液为10% 胎牛血清/无酚红达尔伯克改良伊格尔培养基溶液，在所述的10% 胎牛血清/无酚红达尔伯克改良伊格尔培养基溶液中，胎牛血清的质量百分比浓度为10%；2）一个配制平阴玫瑰细胞液梯度浓度和阳性对照浓度的步骤，所述的梯度浓度分别为体积分数6.25%、体积分数12.5%、体积分数25% ，阳性对照为曲酸，其浓度为25μg/ml KA；3）采用10% FBS/无酚红DMEM 培养液培养小鼠源B16F10黑色素瘤细胞,采用质量百分比浓度为0.25% 的Trpsin‑EDTA消化细胞1min，最后用10% FBS/无酚红DMEM 培养液终止消化；4）配制细胞浓度为9.6*104cell/ml的B16F10小鼠黑色素瘤细胞，置于离心管中，以2.5ml每孔的体积接种，待24h后细胞贴壁，用PBS清洗每孔，之后加样从CO2培养箱取出，置于冰上，用冰PBS清洗每孔2遍；5）每孔加入250μl 质量百分比浓度为1%的Triton X‑100裂解，并置于振荡器上裂解30min；6）将裂解完的细胞收集至冰EP管中，4℃，13000r离心20min，离心结束，取上清，转移至冰好的EP管；7）BCA法进行蛋白定量，定量结束，50μg蛋白+PBS+10μl 10mM L‑DOPA=100 μl置于孔板每孔，将孔板置于37℃烘箱，15min后，475nm下读OD值。