[发明专利]一种利用液相色谱串联质谱检测鱼类小清蛋白的方法有效
| 申请号： | 201810432023.8 | 申请日： | 2018-05-08 |
| 公开（公告）号： | CN108469495B | 公开（公告）日： | 2020-02-07 |
| 发明（设计）人： | 李振兴;孙礼瑞;林洪;葛敏敏;田盛兰;罗晨 | 申请（专利权）人： | 中国海洋大学 |
| 主分类号： | G01N30/96 | 分类号： | G01N30/96;G01N30/88 |
| 代理公司： | 37236 青岛致嘉知识产权代理事务所(普通合伙) | 代理人： | 单虎 |
| 地址： | 266100 山*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | 本发明提出一种利用液相色谱串联质谱检测鱼类小清蛋白的方法，包括如下步骤：步骤1：特征肽段的选择；步骤2：制作标准曲线：以定量肽段标准品的浓度值为横坐标，以其定量子离子峰面积作为纵坐标绘制标准曲线，得到方程；步骤3：待测鱼肉样品经处理酶解后得到的上清液进行HPLC‑MRM‑MS/MS检测，得到鱼肉样品中定量肽段子离子峰面积，求得样品中定量肽段浓度，进而得到样品小清蛋白浓度。本发明目的在于建立一种液相色谱串联质谱方法，该方法具有准确、精密和灵敏等优点。 | ||
| 搜索关键词： | 小清蛋白 肽段 液相色谱串联质谱 离子峰面积 标准曲线 鱼肉样品 检测 鱼类 色谱串联质谱 标准品 上清液 酶解 种液 量子 精密 灵敏 绘制 制作 | ||
【主权项】：
1.一种利用液相色谱串联质谱检测鱼类小清蛋白的方法，其特征在于，包括如下步骤：/n步骤1：特征肽段的选择，包括如下步骤：/n⑴从NCBI和UniProt蛋白库搜索到小清蛋白氨基酸序列；/n⑵将该氨基酸序列导入Skyline软件，模拟酶解过程，得到一系列肽段；/n⑶选择物种同源性高，8-25个氨基酸的肽段，并且尽量避免易被修饰蛋白；/n⑷将酶解后的肽段进行质谱检测，选择响应高、重复性好的肽段作为小清蛋白的定量肽段；/n⑸将肽段进行化学合成，制备纯度高于95％的标准品；/n步骤2：制作标准曲线：以标准品的浓度值为横坐标，以定量肽段的定量子离子峰面积作为纵坐标绘制标准曲线，得到方程；/n步骤3：待测鱼肉样品经处理酶解后，将得到的上清液进行HPLC-MRM-MS/MS检测，得到鱼肉样品中定量肽段子离子峰面积，求得样品中定量肽段浓度，进而得到样品小清蛋白浓度；/n待测蛋白为牙鲆肉中β-小清蛋白，以ALTDAETK，SDFIEEDELK和LFLQNFSASAR为其定性肽段，其中ALTDAETK为定量肽段。/n
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