[发明专利]基于马来酰亚胺衍生物组合的非同位素双标记方法

摘要

本发明提供了一种基于马来酰亚胺衍生物的非同位素双标记绝对定量检测方法和相对定量检测方法，以两种结构类似的N取代马来酰亚胺衍生物分别作为非同位素标记试剂对巯基进行特异性标记，然后以质谱信号强度比以及样品浓度或浓度比作为坐标，得到标准曲线，进而对目标分析物进行定量分析。本发明选用的非同位素标记试剂成本低廉，反应迅速，标记效率高，反应条件简单温和快速，可对不同序列多肽进行质谱定量分析，并可同时实现绝对与相对定量。同时适用面广，只要含有巯基的大分子化合物都能适用，可同时检测多个目标分析物。该技术可用于测定纳米材料表面吸附的蛋白含量，定量检测含半胱氨酸的多肽类疾病标志物，分析含巯基多肽类药物代谢情况等。

主权项

1.一种基于马来酰亚胺衍生物组合的非同位素双标记绝对定量检测方法，包括以下步骤：A)采用第一标记试剂标记目标分析物标准品，记为内标；B)采用第二标记试剂标记目标分析物标准品，并配置成具有浓度梯度的标准品组；C)将步骤A)得到的内标分别与步骤B)得到的具有浓度梯度的标准品组等体积混合，进行基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪检测；D)以质谱信号强度比为纵坐标，步骤B)得到的标准品组的浓度为横坐标作图，得标准曲线；E)采用第二标记试剂标记目标分析物，与步骤A)得到的内标等体积混合，进行基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪检测，根据步骤D)得到的标准曲线得到目标分析物浓度；所述第一标记试剂和第二标记试剂独立的选自N‑甲基马来酰亚胺或N‑乙基马来酰亚胺；或者选自N‑乙基马来酰亚胺或N‑(2‑羟乙基)马来酰亚胺；或者选自N‑苯基马来酰亚胺或N‑苄基马来酰亚胺；且第一标记试剂和第二标记试剂不同；所述目标分析物为具有还原态巯基的大分子化合物。