[发明专利]一种利用sf9悬浮昆虫细胞高效率获得重组杆状病毒的方法在审
| 申请号： | 201810479895.X | 申请日： | 2018-05-18 |
| 公开（公告）号： | CN108642020A | 公开（公告）日： | 2018-10-12 |
| 发明（设计）人： | 张恒;朱海燕;赵泽升;李朝阳;宋桂才;薛希娟 | 申请（专利权）人： | 山东信得动物疫苗有限公司 |
| 主分类号： | C12N7/01 | 分类号： | C12N7/01;C12N15/866 |
| 代理公司： | 潍坊正信致远知识产权代理有限公司 37255 | 代理人： | 刘新子 |
| 地址： | 262200 *** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种利用sf9悬浮昆虫细胞高效率获得重组杆状病毒的方法，包括以下步骤：（1）健康悬浮sf9昆虫细胞作为转染受体细胞，铺设6孔板；（2）采用无内毒素质粒提取试剂盒，提取重组转移载体质粒；（3）采用qBac‑IIIG杆粒和重转移载体P1064质粒体系进行重组杆状病毒拯救载体；（4）采用Sinofection转染试剂辅助将qBac‑IIIG杆粒和重组转移载体P1064转入健康悬浮sf9昆虫细胞中，获得重组杆状病毒。本发明利用sf9悬浮昆虫细胞高效率获得重组杆状病毒方法的建立，具有以下有益效果：可利用悬浮SF9昆虫细胞进行转染，转染效率高，通过荧光显微镜早期可以直接判断转染是否成功及转染效率，为疫苗行业高效获得重组杆状病毒表达疫苗抗原工作打下了工作基础。 | ||
| 搜索关键词： | 重组杆状病毒 悬浮 昆虫细胞 高效率 转染 重组转移载体 转染效率 杆粒 质粒 重组杆状病毒表达 内毒素质粒 提取试剂盒 荧光显微镜 工作基础 受体细胞 疫苗抗原 转染试剂 转移载体 疫苗 铺设 转入 健康 成功 | ||
【主权项】：
1.一种利用sf9悬浮昆虫细胞高效率获得重组杆状病毒的方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）健康悬浮sf9昆虫细胞作为转染受体细胞，铺设6孔板；（2）采用无内毒素质粒提取试剂盒，提取重组转移载体质粒；（3）采用qBac‑IIIG杆粒和重组转移载体P1064体系进行重组杆状病毒拯救载体；（4）采用Sinofection转染试剂辅助将带有GFP标签的qBac‑IIIG杆粒和重组转移载体P1064转入健康悬浮sf9昆虫细胞中，获得重组杆状病毒；（5）转染后荧光显微镜观察sf9细胞荧光出现情况；（6）收集转染后细胞培养上清，进行重组杆状病毒传代，测定F1病毒TCID50。
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