[发明专利]一种HBV DNA定量检测方法在审
| 申请号： | 201810484122.0 | 申请日： | 2018-05-19 |
| 公开（公告）号： | CN108642210A | 公开（公告）日： | 2018-10-12 |
| 发明（设计）人： | 唐笑;田倩;何媛 | 申请（专利权）人： | 长沙金域医学检验所有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/6851;C12R1/93 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 410000 湖南省长沙市高新开发区麓天路*** | 国省代码： | 湖南;43 |
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| 摘要： | 本申请公开一种HBV DNA定量检测方法，包括：步骤一：样本处理；步骤二：准备反应管；步骤三：在反应管上做好标记，分别加已提取的待测样品、阴性质控品、缺失质控品，低速离心数秒；步骤四：对步骤三得到的样本进行PCR扩增；步骤五：放入43℃水浴摇床或杂交箱杂交1.5小时至4小时；然后取玻璃瓶并加入0.5×SSC液，拧紧盖子，一并置于43℃水浴摇床或杂交箱中预热；用A液室温轻摇洗膜；再用C液室温轻摇洗膜，同时配制显色液；将膜条浸泡于显色液中显色10‑15分钟即可观察并并根据膜条上的杂交斑点判断突变位点；具有适应性广和特异性高的优点；检测灵敏度更高、特异性及准确性更好。 | ||
| 搜索关键词： | 水浴摇床 杂交 反应管 膜条 检测灵敏度 配制显色液 阴性质控品 待测样品 低速离心 定量检测 突变位点 样本处理 杂交斑点 玻璃瓶 显色液 质控品 盖子 预热 放入 拧紧 显色 箱中 浸泡 样本 检测 观察 申请 | ||
【主权项】：
1.一种HBV DNA定量检测方法，其特征在于，包括：步骤一：相关试剂配制；步骤二：取0.6m1离心管N个，N＝阴性对照+高值质控品+低值质控品样本数量，分别编号；加入100ul样品处理液A到0.6ml离心管中；取待测样本、阴阳性对照品及质控品各100ul,分别加到0.6ml离心管中，加入25u1样品处理液B,振荡混匀,100℃干浴10min,振荡混匀,13000rpm离心10min(离心时注意固定离心管方向，吸弃上清，13000r pm离心3min,取出震荡混匀后再13000r pm离心5min,保留上清备用；步骤三：若样本及对照品裂解产物保存在‑20℃,使用前置室温解冻,以13000rpm离心5min向分装好反应液中加入处理好的DNA模板以及阳性参控品各2ul,盖紧PCR反应管管盖,并编至扩增和产物分析区；步骤四：对所述步骤三得到的样本进行PCR扩增；步骤五：结果分析与判断。
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