[发明专利]一种快速检测O-GlcNAc修饰的生物感应器/方法及应用有效
| 申请号： | 201810485141.5 | 申请日： | 2018-05-21 |
| 公开（公告）号： | CN110514628A | 公开（公告）日： | 2019-11-29 |
| 发明（设计）人： | 顾玉超;衣雨娇;张瑜;于文功 | 申请（专利权）人： | 中国海洋大学 |
| 主分类号： | G01N21/64 | 分类号： | G01N21/64;G01N33/68 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 266100 山*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | 本发明涉及能快速检测O‑GlcNAc修饰的方法及应用，属于生物工程技术领域。发明的方法包括采用分子克隆的方法通过在一对能发生荧光能量共振转移的“荧光蛋白对”之间连接GlcNAc结合蛋白和目的蛋白或肽段，构建出生物感应器及GafD突变的阴性对照；再将生物感应器与O‑GlcNAc糖基转移酶OGT在大肠杆菌中共表达，利用生物感应器内GlcNAc结合蛋白与O‑GlcNAc的结合能使“荧光对”距离缩短导致发生荧光共振能量转移，通过检测生物感应器的荧光能量共振转移来检测目的蛋白或肽段是否有O‑GlcNAc修饰。该检测方法具有快速、微量、灵敏、准确的检测特点，可用于蛋白及肽段是否有O‑GlcNAc修饰的确定及修饰位点的确定。 | ||
| 搜索关键词： | 生物感应器 修饰 肽段 检测 结合蛋白 目的蛋白 荧光能量 共振 结合能 生物工程技术领域 荧光共振能量转移 大肠杆菌 糖基转移酶 分子克隆 距离缩短 快速检测 阴性对照 荧光蛋白 构建 可用 位点 荧光 突变 灵敏 蛋白 应用 | ||
【主权项】：
1.一种荧光能量共振转移（FRET）的生物感应器检测蛋白及肽段O-GlcNAc修饰及修饰位点的方法，其特征在于，采用基因克隆技术选择并获得能发生“荧光能量共振转移”的荧光蛋白对（eCFP 与Venus）的基因序列，并通过将凝集素GafD与目的蛋白（或肽段）依次连接在这对荧光蛋白中间，获得检测目标特定的生物感应器；通过在大肠杆菌与O-GlcNAc糖基转移酶构建共表达系统，诱导表达后当生物感应器内的目的蛋白或肽段发生O-GlcNAc修饰，凝集素GafD与O-GlcNAc结合使得“荧光对”距离至10nm内，导致其荧光共振能量转移效率的变化，据此推测目的蛋白或肽段是否有O-GlcNAc修饰。/n
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