[发明专利]一种高活性卵类粘蛋白的分离方法

摘要

本发明公开了一种高活性卵类粘蛋白的分离方法，属于蛋白分离技术领域，其步骤为：1)、鸡蛋清处理液的制备，2)、层析分离，3)、蛋白纯度检测，4)、蛋白质的浓缩。本发明采用CM‑Sepharose FF高效分离卵类粘蛋白，样品处理不使用有机溶剂，分离过程简单，分离耗时短，以期获得高免疫活性的卵类粘蛋白纯品。经过蛋白纯度检测验证和免疫活性评估，与sigma公司卵类粘蛋白纯品相似度高，表明其具备较高的免疫活性。

主权项

1.一种高活性卵类粘蛋白的分离方法，其特征步骤为：1)、鸡蛋清处理液的制备：新鲜鸡蛋去壳并分离出蛋清，加入等体积蒸馏水后置于冰浴中，用玻璃棒缓慢搅拌直到胶状部分消失；用2M HCl调pH到6.0，冰浴中搅拌3h后,离心除去球蛋白等干扰蛋白；上清液继续滴加2M HCl调至pH3.8,冰浴中搅拌3h，再次离心，将上清液分装成5ml每管冻存备用；2)、层析分离：用醋酸‑醋酸钠pH4.7平衡CM‑sepharose FF层析柱1.5×20cm，至紫外监测仪读数稳定；上样5ml鸡蛋清处理液，控制流速在1.5ml/min，继续用pH4.7的醋酸盐缓冲液进行洗脱，同时连通记录仪，洗脱结束后收集蛋白样品；3)、蛋白纯度检测：将分离所得蛋白收集，取样10μl与10μl上样缓冲液混合后，取15μl加入聚丙烯酰胺凝胶SDS‑PAGE胶孔内，电泳后，凝胶经考马斯亮蓝显色；4)、蛋白质的浓缩：将收集到的卵类粘蛋白纯品用PEG浓缩，透析后冻干，于‑20℃冻存。