[发明专利]一种产生N-乙酰氨基葡萄糖的基因工程菌及其应用

摘要

本发明公开了一种产生N‑乙酰氨基葡萄糖的基因工程菌及其应用,所述基因工程菌利用阿拉伯糖或鼠李糖同时诱导N‑乙酰氨基葡萄糖合成途径的强化，以及旁路代谢途径的弱化，实现精准调控。本发明所构建的大肠杆菌基因工程菌W3110‑GLA‑1(阿拉伯糖诱导型)、W3110‑GLA‑2(鼠李糖诱导型)以葡萄糖为底物可高效合成N‑乙酰氨基葡萄糖，在5L发酵罐发酵72h后N‑乙酰氨基葡萄糖的产量达到168g/L、160g/L，转化率约48％、47％，具有较强的工业化生产潜力。

主权项

1.一株生产N‑乙酰氨基葡萄糖的基因工程菌，其特征在于：具有诱导型启动子控制的来源于T7噬菌体的RNA聚合酶；包含T7启动子控制的来自酿酒酵母菌的Sc‑gna1基因；具有多个T7启动子控制的来自大肠杆菌的glmS基因；nagA、nagB、nagC、nagE、manX、manY、manZ七个基因缺陷型；具有诱导型启动子控制的dCas9，利用CRISPR/dCas9基因干扰技术，动态干扰pfkA基因表达强度，使pfkA基因被关闭或以低水平表达；其中，所述编码基因Sc‑gna1的核苷酸序列为序列表400<1>所示序列；所述编码基因glmS的核苷酸序列为序列表400<2>所示序列；所述编码基因T7RNA聚合酶的核苷酸序列为序列表400<5>所示序列；所述编码基因nagA的核苷酸序列为序列表400<6>所示序列；所述编码基因nagB的核苷酸序列为序列表400<7>所示序列；所述编码基因nagC的核苷酸序列为序列表400<8>所示序列；所述编码基因nagE的核苷酸序列为序列表400<9>所示序列；所述编码基因manX的核苷酸序列为序列表400<10>所示序列；所述编码基因manY的核苷酸序列为序列表400<11>所示序列；所述编码基因manZ的核苷酸序列为序列表400<12>所示序列；所述编码基因pfkA的核苷酸序列为序列表400<13>所示序列；所述编码基因T7启动子的核苷酸序列为序列表400<14>所示序列；所述编码基因T7终止子的核苷酸序列为序列表400<15>所示序列；所述生产N‑乙酰氨基葡萄糖的基因工程菌E.coli W3110为宿主细胞。优选的，上述生产N‑乙酰氨基葡萄糖的基因工程菌，所述诱导型启动子为阿拉伯糖启动子Para或鼠李糖启动子Prha，其中，所述编码阿拉伯糖启动子基因Para的核苷酸序列为序列表400<3>所示序列；所述编码鼠李糖启动子基因Prha的核苷酸序列为序列表400<4>所示序列。