[发明专利]单环刺螠糖胺聚糖在抗血栓方面的应用

摘要

本发明属于药物制剂领域，具体涉及一种单环刺螠糖胺聚糖在抗血栓方面的应用。所述的单环刺螠糖胺聚糖的制备包括下述步骤：(1)原料处理：将原料单环刺螠制成匀浆液；(2)酶解；(3)超滤；(4)糖胺聚糖的制备：①除蛋白质；②醇沉、洗涤；③阴离子交换柱层析；④凝胶过滤层析得高纯糖胺聚糖。本方法反应条件温和、糖胺聚糖得率及纯度高，抗血栓作用效果好。

主权项

1.一种单环刺螠糖胺聚糖在抗血栓方面的应用，其特征在于，所述的单环刺螠糖胺聚糖采用下述方式制备：(1)原料处理：将原料单环刺螠洗净后，匀浆，制成匀浆液；(2)酶解：向所述匀浆液中加入枯草杆菌中性蛋白酶，在43℃‑47℃水浴条件下酶解4‑6h，酶解液煮沸灭酶后，5000r‑8000r/min离心10min‑15min，得上清液；(3)超滤：将所述上清液通过相对分子质量1万的中空纤维滤膜超滤分离，得到相对分子质量1万以下和相对分子质量1万以上的两种组分的液体；(4)糖胺聚糖的制备：①除蛋白质：将所述相对分子质量1万以上的组分的液体浓缩至该液体体积的1/3‑1/4，先用HCl水溶液调pH至2.0，离心除去沉淀，上清液用NaOH水溶液调pH至7.0，离心除去沉淀，上清液加入三氯乙酸使三氯乙酸的最终质量浓度为3％‑5％，离心除去蛋白质沉淀；②醇沉、洗涤：将步骤①获得的上清液在搅拌下加入乙醇，使乙醇的体积浓度为70％‑80％，于4℃条件下静置20‑28小时，5000r‑8000r/min离心10min‑15min，移去上清液，沉淀依次用丙酮和无水乙醇洗涤2‑4次，得粗提糖胺聚糖；③阴离子交换柱层析：将粗提糖胺聚糖溶于蒸馏水中，使其质量浓度为1％‑3％，加到阴离子交换柱中，先用pH＝5.0‑5.5乙酸‑乙酸钠缓冲溶液洗脱，再用0‑2mol/L梯度的NaCl水溶液洗脱，洗脱液浓缩至洗脱液体积的1/2‑1/4、透析、再浓缩至透析后液体积的1/3‑1/4；④凝胶过滤层析：将步骤③获得的浓缩液上样于SephadexG‑100凝胶过滤柱，进一步分离纯化，收集的流出液浓缩至流出液体积的1/4‑1/6，浓缩液冷冻干燥得高纯糖胺聚糖。