[发明专利]犬胎膜间充质干细胞及制备方法和使用的培养基

摘要

本发明涉及犬胎膜间充质干细胞及制备方法和使用的培养基。所述犬胎膜间充质干细胞是通过包括以下步骤的方法制备得到：消毒和清洗、消化处理、细胞培养、细胞传代、细胞冻存。本发明从犬胎膜制备间充质干细胞的方法呈现优异的技术效果，并且所用的培养基能够大大提高制备干细胞的效率。所制得的间充质干细胞能够有益的治疗犬科动物的关节炎、骨折、肌肉损伤、韧带损伤、软骨损伤、关节损伤、认知功能障碍、免疫介导性疾病、干眼症、复发性葡萄膜炎、肝脏疾病、心脏病、肾脏疾病、糖尿病、胃肠道疾病、甲状腺疾病、皮肤病。

主权项

1.一种犬胎膜间充质干细胞，其细胞纯度大于85％；该犬胎膜间充质干细胞是照包括以下步骤的方法制备得到的：(1)消毒和清洗：将胎盘依次使用酒精以及生理盐水反复漂洗表面，对胎盘进行消毒处理；接着撕取胎膜，剔除血管后，使用磷酸缓冲液再次冲洗，去除表面污血、杂质；(2)消化处理：将步骤(1)得到的胎膜组织剪成组织块，将组织块放入消化酶溶液中，消化处理0.5‑3小时，过滤清除组织块后，加入间充质干细胞培养基以终止消化，然后对消化得到的细胞进行细胞清洗，最终获得细胞悬液；(3)细胞培养：将步骤(2)得到的细胞悬液放入培养容器，再将培养容器放进培养箱中进行培养，培养至第2‑7天时将培养容器从培养箱中取出，补加适量间充质干细胞培养基，继续培养；在第8‑11天时将培养容器从培养箱中取出，进行第一次全换液，继续培养；往后每1‑3天进行一次全换液；(4)细胞传代：当培养容器中的贴壁细胞融合率达到40％‑70％以后，利用消化酶将贴壁细胞脱离容器底部，离心，抽走上清液，加入充质干细胞培养基重新悬浮细胞，再接种于培养容器进行培养，此后每1‑3天换液一次，直至融合率达到70‑90％后，即得P1代胎膜间充质干细胞；接着照上述培养方法进行必要的传代；任选的(5)冻存：将步骤(4)所得胎膜间充质干细胞中添加细胞冻存液于液氮中冷冻，备用。