[发明专利]斑马鱼notch2基因突变体的制备方法有效
| 申请号： | 201810526041.2 | 申请日： | 2018-05-28 |
| 公开（公告）号： | CN108707628B | 公开（公告）日： | 2021-11-23 |
| 发明（设计）人： | 张庆华;岳倩文;徐行;季策;李伟明 | 申请（专利权）人： | 上海海洋大学 |
| 主分类号： | C12N15/90 | 分类号： | C12N15/90;C12N9/22;A01K67/027 |
| 代理公司： | 上海伯瑞杰知识产权代理有限公司 31227 | 代理人： | 曹莉 |
| 地址： | 201306 上*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明公开了涉及一种斑马鱼notch2基因突变体的制备方法；包括如下步骤：确定notch2基因敲除的靶点位置；以pUC19‑gRNA scaffold质粒为模板，使用引物T7‑notch2‑sfd、tracr rev进行PCR扩增；对PCR产物纯化、体外转录获得gRNA；将gRNA与Cas9蛋白显微注射入斑马鱼胚胎一细胞期中，筛选获得稳定遗传的notch2基因突变体。本发明利用CRISPR/Cas9技术，通过选择独特的一段打靶区，使得斑马鱼中的notch2基因被敲除，又不“误伤”其他基因，形成Notch2敲除的斑马鱼，为后续基因功能的深入研究提供了实验材料，对于研究Notch信号通路意义重大。 | ||
| 搜索关键词： | 斑马 notch2 基因 突变体 制备 方法 | ||
【主权项】：
1.一种斑马鱼notch2基因突变体的制备方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：S1、确定notch2基因敲除的靶点在斑马鱼notch2基因序列的第四个外显子上；S2、根据步骤S1确定的靶点序列设计扩增引物；S3、以pUC 19‑gRNA scaffold质粒为模板，使用引物T7‑notch2‑sfd、tracr rev进行PCR扩增；S4、对步骤S3的PCR产物进行纯化，体外转录获得gRNA；S5、将gRNA与Cas9蛋白导入斑马鱼中；S6、培养获得稳定遗传的斑马鱼notch2基因突变体。
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