[发明专利]一种免疫缺陷大鼠动物模型的构建方法及应用在审
| 申请号： | 201810532095.X | 申请日： | 2018-05-29 |
| 公开（公告）号： | CN109868285A | 公开（公告）日： | 2019-06-11 |
| 发明（设计）人： | 祝献民;范国平 | 申请（专利权）人： | 江苏艾尔康生物医药科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N15/113;C12N5/10;C12N15/90;A01K67/027 |
| 代理公司： | 上海麦其知识产权代理事务所(普通合伙) 31257 | 代理人： | 董红曼 |
| 地址： | 214000 江苏省无锡市无*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种免疫缺陷大鼠动物模型的构建方法及应用，分别构建大鼠Rag1基因第2外显子、Rag2基因第3外显子、Il2rg基因第1外显子的sgRNA的表达载体，通过体外转录表达，获得同时敲除了Rag1基因和Rag2基因的大鼠，获得Il2rg基因被敲除的大鼠，杂交获得Rag1、Rag2和Il2rg基因均被敲除的大鼠。本发明方法构建的大鼠SD‑RG具有免疫缺陷的表型，方便进行多种肿瘤的移植，并支持其快速生长，可以广泛应用于人源化动物模型、干细胞和肿瘤研究等多种领域。 | ||
| 搜索关键词： | 大鼠 基因 构建 免疫缺陷 大鼠动物模型 外显子 敲除 应用 第2外显子 表达载体 动物模型 快速生长 体外转录 肿瘤研究 干细胞 人源化 表型 肿瘤 杂交 移植 | ||
【主权项】：
1.一种免疫缺陷大鼠动物模型的构建方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：(1)分别构建表达载体；所述表达载体分别为特异性靶向大鼠Rag1基因第2外显子的sgRNA的表达载体、大鼠Rag2基因第3外显子的sgRNA的表达载体、大鼠Il2rg基因第1外显子的sgRNA的表达载体；(2)通过体外转录分别表达得到大鼠Rag1基因第2外显子的sgRNA、Rag2基因第3外显子的sgRNA、Il2rg基因第1外显子的sgRNA、以及Cas9mRNA；(3)将大鼠Rag1基因第2外显子的sgRNA、Rag2基因第3外显子的sgRNA和Cas9mRNA分别纯化后，混合，注射入大鼠受精卵细胞中，移植入大鼠输卵管中，获得同时敲除了Rag1基因和Rag2基因的大鼠；将大鼠Il2rg基因第1外显子的sgRNA和Cas9mRNA分别纯化后，混合，注射入大鼠受精卵细胞中，移植入大鼠输卵管中，获得敲除了Il2rg基因的大鼠；(4)将步骤(3)获得的所述同时敲除了Rag1和Rag2基因的大鼠和所述敲除了Il2rg基因的大鼠杂交，获得Rag1、Rag2和Il2rg基因均敲除的免疫缺陷大鼠动物模型SD‑RG。
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