[发明专利]一种复杂糖蛋白二硫键定位的方法有效
申请号: | 201810550275.0 | 申请日: | 2018-05-31 |
公开(公告)号: | CN108802218B | 公开(公告)日: | 2021-10-19 |
发明(设计)人: | 何景昌;陈志鑫;梁艳;刘利波 | 申请(专利权)人: | 北京泰德制药股份有限公司 |
主分类号: | G01N30/02 | 分类号: | G01N30/02;G01N30/89;G01N33/68 |
代理公司: | 暂无信息 | 代理人: | 暂无信息 |
地址: | 100176 北京市大*** | 国省代码: | 北京;11 |
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摘要: | 本发明公开了一种复杂糖蛋白二硫键定位的方法。该方法包括以下步骤:1)通过反相色谱法将α与β亚基进行分收;2)对分收后的α和β亚基,进行变性处理,然后用超滤管进行脱盐换液;3)采用多种特异性和/或非特异性酶对变性后的α和β亚基进行反复酶切,最后终止酶切;4)对终止酶切后的样品进行质量肽谱图分析,定位二硫键。本发明的方法可以克服复杂糖蛋白的蛋白结构和糖链等空间位阻导致酶切效率低的影响,适用于糖蛋白复杂连接方式二硫键的定位。 | ||
搜索关键词: | 一种 复杂 糖蛋白 二硫键 定位 方法 | ||
【主权项】:
1.一种复杂糖蛋白二硫键定位的方法,该方法包括以下步骤:(1)α与β亚基的制备:通过反相色谱法对α与β亚基进行分收,分收后的α和β亚基经冷冻浓缩离心机干燥,超纯水重悬;(2)变性处理:将分收后的α和β亚基,分别进行变性处理,然后用超滤管进行脱盐换液;(3)α与β亚基酶切:采用多种特异性和/或非特异性酶对变性后的α和β亚基进行反复酶切,最后终止酶切;(4)对终止酶切后的样品进行质量肽谱图分析,定位二硫键。
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