[发明专利]一种基于单粒径并可同时检测血清和尿液样本中视黄醇结合蛋白的试剂盒

摘要

本发明公开了一种基于单粒径并可同时检测血清和尿液样本中视黄醇结合蛋白的试剂盒，所述试剂盒包括试剂R1、试剂R2和校准品A、校准品B，所述试剂R2包括乳胶‑多克隆抗体交联物和试剂R2缓冲液，所述乳胶‑多克隆抗体交联物占所述试剂R2的质量百分比为0.05～1.0％，所述试剂R2缓冲液组分为：50～120mM Hepes缓冲液、0.1％Proclin 300、1～5％蔗糖、1～5％NaCl、0.1～1％曲拉通，其余为纯化水，pH为6.5～8.5。本发明所述试剂盒具有血尿同测、操作简单、灵敏度高、线性范围宽、成本低(不仅体现在仅适用一种粒径和多克隆抗体就能满足检测要求，还体现在制备乳胶‑多克隆抗体时仅离心一次就能满足标记需求)且利于市场推广的优点。同时该检测试剂盒兼容市场上大多数生化检测设备，可直接进入市场。

主权项

1.一种基于单粒径并可同时检测血清和尿液样本中视黄醇结合蛋白的试剂盒，所述试剂盒包括试剂R1、试剂R2和校准品A、校准品B，其中：所述试剂R1组分为：50～120mM Hepes缓冲液、0.1％Proclin 300、1～5％NaCl、0.1～1％曲拉通，其余为纯化水，pH 6.5～8.5；所述试剂R2包括乳胶‑多克隆抗体交联物和试剂R2缓冲液，所述乳胶‑多克隆抗体交联物占所述试剂R2的质量百分比为0.05～1.0％，所述试剂R2缓冲液组分为：50～120mM Hepes缓冲液、0.1％Proclin 300、1～5％蔗糖、1～5％NaCl、0.1～1％曲拉通，其余为纯化水，pH为6.5～8.5；所述乳胶‑多克隆抗体交联物采用胶乳颗粒和多克隆抗体制备得到；所述胶乳颗粒为粒径为80～200nm的聚苯乙烯胶乳；所述多克隆抗体与所述乳胶颗粒的比例为25～100μg∶1mg；所述校准品A包括校准品A稀释液和视黄醇结合蛋白；所述校准品A稀释液组分为：50～150mM Hepes缓冲液、0.1％Proclin 300、1～5％蔗糖、1～5％NaCl、0.1～1％曲拉通，其余为纯化水，pH为6.5～8.5；所述视黄醇结合蛋白的浓度梯度为140.00、70.00、35.00、15.00、5.00、0.00mg/L；所述校准品B包括校准品B稀释液和视黄醇结合蛋白；所述校准品B稀释液组分为：50～150mM Hepes缓冲液、0.1％Proclin 300、1～5％蔗糖、1～5％NaCl、0.1～1％曲拉通，其余为纯化水，pH为6.5～8.5；所述视黄醇结合蛋白的浓度梯度为20.00、10.00、5.00、2.50、1.00、0.00mg/L；所述试剂R2的制备方法为：(1)将粒径为80～200nm的胶乳颗粒用pH 9.0的50mM硼酸缓冲液稀释到终浓度为1％，室温反应5min；(2)加入EDC，使EDC∶胶乳＝10～150μg∶1mg，室温反应30min；(3)加入兔抗人RBP多克隆抗体，使兔抗人RBP多克隆抗体∶胶乳＝25～100μg∶1mg，混合搅拌，室温反应1h；(4)加入BSA，使BSA终浓度为1％，室温封闭2h；(5)室温15,000rpm离心去除上清；(6)用50～120mM Hepes缓冲液、0.1％Proclin 300、1～5％蔗糖、1～5％NaCl、0.1～1％曲拉通，其余为纯化水，pH为6.5～8.5溶解所述步骤(5)中去除上清后的胶乳‑兔抗人RBP多克隆抗体，使其终浓度为0.05～1.0％，超声分散后置于4℃备用。