[发明专利]一种基于DNA特征序列的细菌核酸测序鉴定方法及细菌鉴定试剂盒在审
| 申请号： | 201810565692.2 | 申请日： | 2018-06-04 |
| 公开（公告）号： | CN108410971A | 公开（公告）日： | 2018-08-17 |
| 发明（设计）人： | 冯震;蒋波;李芳;洪小栩;许华玉;秦峰;刘浩;杨美成 | 申请（专利权）人： | 上海市食品药品检验所 |
| 主分类号： | C12Q1/6869 | 分类号： | C12Q1/6869;C12Q1/6806;C12Q1/04;C12M1/34 |
| 代理公司： | 上海申新律师事务所 31272 | 代理人： | 俞涤炯 |
| 地址： | 201200 上*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种基于DNA特征序列的细菌核酸测序鉴定方法及试剂盒，该方法包括步骤：选取待鉴定的细菌菌株，并提取和纯化其基因组DNA；PCR扩增纯化后的基因组DNA的特征序列片段；提取和纯化PCR扩增产物；测定纯化后的PCR扩增产物的序列，并采用通用性序列拼接软件，去除引物区，获得相应片段的DNA序列；将相应片段的DNA序列导入标准核酸序列数据库进行序列比对，进行细菌菌株的鉴定；其中，菌株的基因组DNA的提取和纯化采用溶菌酶、十二烷基硫酸钠、十六烷基三甲基溴化铵进行菌体破碎；采用苯酚‑氯仿‑异戊醇、乙醇沉淀核酸，获得符合质量控制要求的基因组DNA。本发明可为细菌核酸测序鉴定方法提供客观、准确的判定依据，实现细菌污染物的快速、一体化鉴定。 | ||
| 搜索关键词： | 基因组DNA 测序鉴定 特征序列 细菌核酸 细菌菌株 试剂盒 十六烷基三甲基溴化铵 十二烷基硫酸钠 乙醇沉淀核酸 质量控制要求 细菌污染物 序列数据库 标准核酸 菌体破碎 细菌鉴定 序列比对 序列拼接 溶菌酶 异戊醇 引物区 苯酚 菌株 氯仿 去除 判定 一体化 | ||
【主权项】：
1.一种基于DNA特征序列的细菌核酸测序鉴定方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤一、选取待鉴定的细菌菌株，并提取和纯化所述菌株的基因组DNA；步骤二、采用扩增引物PCR扩增步骤一中纯化后的基因组DNA的特征序列片段；步骤三、提取和纯化步骤二中获得的PCR扩增产物；步骤四、测定步骤二中纯化后的PCR扩增产物的序列，并采用通用性序列拼接软件，去除引物区，获得相应片段的DNA序列；步骤五、将步骤四所述的相应片段的DNA序列导入标准核酸序列数据库进行序列比对，进行细菌菌株的鉴定；其中，所述步骤一中，菌株的基因组DNA的提取和纯化采用溶菌酶、十二烷基硫酸钠、十六烷基三甲基溴化铵进行菌体破碎；采用苯酚‑氯仿‑异戊醇、乙醇沉淀核酸，获得符合质量控制要求的基因组DNA。
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