[发明专利]一种快速评估CAR-T细胞体外杀伤效率的方法在审
| 申请号： | 201810566144.1 | 申请日： | 2018-06-04 |
| 公开（公告）号： | CN108753916A | 公开（公告）日： | 2018-11-06 |
| 发明（设计）人： | 邓文海;高基民;钱文斌 | 申请（专利权）人： | 杭州启澜生物医学技术有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/66 | 分类号： | C12Q1/66;C12Q1/06 |
| 代理公司： | 杭州求是专利事务所有限公司 33200 | 代理人： | 黄欢娣;邱启旺 |
| 地址： | 310000 浙江省杭州市滨*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种简单、快速评估CAR‑T细胞体外杀伤效率的方法，包括步骤：1)贴壁或悬浮培养肿瘤细胞，其中所述肿瘤细胞为含有CAR‑T细胞特异性识别抗原表位并稳定转染荧光素酶基因的肿瘤靶细胞；2)加入CAR‑T细胞，获得CAR‑T细胞和肿瘤细胞的混合培养体系；3)离心沉淀所述的混合培养体系中的细胞，培养基重悬细胞后，加入荧光素酶底物，检测细胞的荧光素酶活力值，记为K；4)设置对照如下：所述培养体系中不加入CAR‑T细胞，检测细胞的荧光素酶活力值为Kmin；培养基中加入细胞裂解液导致最大程度的细胞杀伤，检测细胞的荧光素酶活力值为Kmax；5)计算CAR‑T对肿瘤靶细胞的杀伤效率公式：杀伤效率％＝(Kmin‑K)/(Kmin‑Kmax)x100％。 | ||
| 搜索关键词： | 杀伤 荧光素酶活力 细胞 肿瘤细胞 混合培养体系 快速评估 培养基 靶细胞 检测 肿瘤 荧光素酶底物 荧光素酶基因 特异性识别 细胞裂解液 抗原表位 离心沉淀 培养体系 细胞杀伤 效率公式 悬浮培养 贴壁 重悬 转染 | ||
【主权项】：
1.一种快速检测CAR‑T细胞对肿瘤靶细胞体外杀伤效率的方法，其特征在于，该方法利用荧光素酶标记肿瘤靶细胞，通过检测荧光素酶活力值即可获得肿瘤靶细胞存活细胞数量，以此评价CAR‑T细胞对肿瘤靶细胞体外杀伤效率。
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