[发明专利]一种人源硒蛋白H的原核表达纯化方法有效
| 申请号： | 201810567021.X | 申请日： | 2018-06-05 |
| 公开（公告）号： | CN108823230B | 公开（公告）日： | 2022-03-18 |
| 发明（设计）人： | 祝建洪;孙胜楠;张雄;范辉辉 | 申请（专利权）人： | 温州医科大学 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C07K14/47;C07K1/16 |
| 代理公司： | 长沙星耀专利事务所(普通合伙) 43205 | 代理人： | 许伯严 |
| 地址： | 325035 浙江省*** | 国省代码： | 浙江;33 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | 本发明涉及一种人源硒蛋白H的原核表达纯化方法，该方法将人神经母细胞瘤SK‑N‑SH细胞的RNA转录为cDNA，进一步用PCR方法获得人硒蛋白H基因，并将该基因连接到原核表达载体中，转化至大肠杆菌中进行诱导表达，表达产物用Glutathione‑Sepharose TM4B纯化。本发明的方法能够在保证不突变硒蛋白H的硒代半胱氨酸活性的前提下在大肠杆菌中表达硒蛋白H。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 人源硒 蛋白 表达 纯化 方法 | ||
【主权项】：
1.一种人源硒蛋白H的原核表达纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）克隆人硒蛋白H的基因，用反转录PCR法扩增硒蛋白H的基因；（2）将上述扩增的硒蛋白基因与表达载体连接，构建人硒蛋白H基因表达载体；（3）将上述表达载体转化到用于克隆的大肠杆菌，挑选阳性克隆提取质粒，转化至用于表达的大肠杆菌，得到重组后的大肠杆菌；（4）诱导上述重组后的大肠杆菌，使其表达人硒蛋白H；（5）纯化人硒蛋白H：a. 收集菌体溶于加入蛋白酶抑制剂的PBS中超声破碎，取细菌裂解上清；b.利用Glutathione‑Sepharose TM4B进行纯化。
下载完整专利技术内容需要扣除积分，VIP会员可以免费下载。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于温州医科大学，未经温州医科大学许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/patent/201810567021.X/，转载请声明来源钻瓜专利网。
