[发明专利]一种蓝莓种苗的高效脱毒繁育方法

摘要

本发明涉及蓝莓繁育领域，提供了一种蓝莓种苗的高效脱毒繁育方法，包括如下步骤：(1)外植体的选择；(2)诱导培养；(3)热处理；(4)化学药剂处理；(5)继代培养；(6)瓶内生根培养；(7)瓶外生根培养；(8)炼苗与移栽。本发明的优点在于：本发明先利用蓝莓的嫩枝或半木质化新稍作为材料，在改良的WPM诱导培养基基础上，快速繁殖蓝莓组培苗；紧接着，再进一步选取脱毒处理后的蓝莓组培苗的茎尖进一步进行培养，至最终获得目标种苗；本发明所得的蓝莓目标种苗的生根率高达90％以上，脱毒率达95％以上，为今后蓝莓的育种工作奠定了有效基础。

主权项

1.一种蓝莓种苗的高效脱毒繁育方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)外植体的选择生长季节，选取健壮的嫩枝或半木质化新稍，切割为1‑2cm的茎段，并于超净工作台上用70％酒精消毒1‑2min，0.1％升汞灭菌6‑10min，最后用无菌水冲洗4‑6次；(2)诱导培养将经步骤(1)处理后的外植体直接接入改良的WPM诱导培养基中，并于23‑25℃下进行诱导培养，待叶芽萌发后，取所述叶芽的芽尖继续培养，即得蓝莓组培苗；其中，改良的WPM诱导培养基具体为：WPM+蔗糖+琼脂+激素，光照强度为1600‑2500LX，光照时间保持11‑13h/d；(3)热处理将蓝莓组培苗在40‑48℃下热处理2‑2.5d；(4)化学药剂处理切取步骤(3)处理后的组培苗的茎尖，并将所述茎尖置于含有病毒唑的培养基中，在21‑25℃条件下继续培养45‑55d；其中，含有病毒唑的培养基具体为：WPM+蔗糖+琼脂+激素+病毒唑，且病毒唑的浓度具体为0.2‑0.3mg/L；(5)继代培养将步骤(4)处理后的茎尖在继代培养中进行继代培养，每30‑40d一代，继代4‑5次，得新的蓝莓组培苗；其中，继代培养的配方同步骤(2)中改良的WPM诱导培养基；(6)瓶内生根培养继代培养后，将新的蓝莓组培苗接入到已装有改良的1/2WPM生根培养基的试管瓶中，并于20‑25℃下进行生根培养60‑70d；其中，改良的1/2WPM生根培养基具体为：1/2WPM+蔗糖+琼脂+激素；培养方式为：先暗培养一周，再进行1600‑2500LX强度的光照培养，以培养出完整的小植株；(7)瓶外生根培养将步骤(6)所得的小植株继续转移至改良的1/6WPM瓶外生根培养基中，以珍珠岩为支持物，于20‑25℃下进行生根培养30‑40d；其中，改良的1/6WPM瓶外生根培养基具体为：1/6WPM+蔗糖+琼脂+激素，光照强度为2000‑2500LX，光照时间保持11‑13h/d；(8)炼苗与移栽将步骤(7)所得的生根苗放于光线较好的室内，并揭开盖；炼苗3‑5d后，将其移至温室大棚进行穴盘培育，培育期间，注意肥水管理和遮阴；55‑65d后，将其移至棚外进行后续的壮苗培育。