[发明专利]一种肺癌高通量测序文库及其构建方法和应用在审
| 申请号： | 201810586885.6 | 申请日： | 2018-06-08 |
| 公开（公告）号： | CN108753924A | 公开（公告）日： | 2018-11-06 |
| 发明（设计）人： | 沈伟强;胡文玮;史善甫;奚云;葛海鹏;陈悦科 | 申请（专利权）人： | 安徽鼎晶生物科技有限公司;上海鼎晶生物医药科技股份有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6806 | 分类号： | C12Q1/6806;C12Q1/6886;C12Q1/6869;C40B50/06 |
| 代理公司： | 北京高沃律师事务所 11569 | 代理人： | 刘奇 |
| 地址： | 236600 安徽省阜阳市*** | 国省代码： | 安徽;34 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种肺癌高通量测序文库的构建方法，属于高通量测序领域。本发明提供的肺癌高通量测序文库的构建方法包括初始文库的生成，初始文库的纯化，测序文库的生成和测序文库的纯化。本发明提供的肺癌高通量测序文库构建方法全程只需要更换一次容器，大大减少了交叉污染的可能性。本发明提供的方法利用磁珠反应结合洗涤操作，最大程度保证了纯化的高效和便捷。利用本发明提供的方法，能使模板的利用率大大提高。 | ||
| 搜索关键词： | 测序文库 高通量 构建 肺癌 文库 高通量测序 交叉污染 洗涤操作 次容器 磁珠 全程 应用 保证 | ||
【主权项】：
1.一种肺癌高通量测序文库的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)以肺癌相关片段为模板进行多重PCR扩增，得到肺癌初始文库；(2)向装有所述步骤(1)肺癌初始文库的原管中加入0.3～0.7倍PCR反应体系体积的磁珠液，反应1～30min后，取上清液至新管，弃磁珠；(3)向所述步骤(2)含有上清液的新管中加入0.7～1.1倍PCR反应体系体积的磁珠液，反应1～30min后，弃上清液，得到磁珠；(4)对所述步骤(3)磁珠进行清洗纯化，得到纯化的肺癌初始文库；(5)对所述步骤(4)纯化的肺癌初始文库进行第二次PCR扩增，得到肺癌测序文库；(6)向装有所述步骤(5)肺癌测序文库的原管中加入0.8～1.2倍第二次PCR反应体系体积的磁珠液，反应1～30min后，弃上清液，得到磁珠；(7)对所述步骤(6)磁珠进行清洗纯化，得到纯化磁球；(8)洗脱所述纯化磁珠表面的DNA，得到的洗脱液即为纯化的肺癌测序文库；所述步骤(3)～(8)在同一个管中操作。
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