[发明专利]一种能够快速获得牙鲆稳转细胞系的载体在审
| 申请号： | 201810587974.2 | 申请日： | 2018-06-08 |
| 公开（公告）号： | CN108728466A | 公开（公告）日： | 2018-11-02 |
| 发明（设计）人： | 王旭波;俞海洋;张全启 | 申请（专利权）人： | 中国海洋大学 |
| 主分类号： | C12N15/65 | 分类号： | C12N15/65;C12N15/85;C12N15/88;C12N5/10 |
| 代理公司： | 青岛海昊知识产权事务所有限公司 37201 | 代理人： | 曾庆国 |
| 地址： | 266003 山*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种在牙鲆鱼中实现高效稳定转染的表达载体，本发明载体采用Tol2转座子，结合编码合成转座酶的质粒pCS‑TP共转染能够显著提高牙鲆鱼细胞整合外源基因的能力。发明载体添加了新霉素抗性筛选标记，从而实现了仅仅依靠传统的脂质体转染加抗性筛选的方式，即可获得较多的重组细胞，极大的提高了牙鲆鱼细胞筛选的到稳转细胞系的效率。发明载体添加了EGFP荧光标签，能够方便的示踪转入细胞系的外源基因的表达情况。更重要的，本发明载体采用优化后的牙鲆β‑actin启动子替代传统哺乳动物表达载体中常用的CMV启动子，创造性的获得了一种更适应牙鲆鱼细胞系外源基因表达的载体，从而实现外源基因在牙鲆鱼的各种细胞系中都能够高效稳定的表达。 | ||
| 搜索关键词： | 牙鲆鱼 外源基因 牙鲆 哺乳动物表达载体 外源基因表达 新霉素抗性 脂质体转染 编码合成 表达载体 抗性筛选 筛选标记 细胞筛选 细胞整合 荧光标签 重组细胞 传统的 共转染 转座酶 转座子 示踪 质粒 转染 转入 替代 优化 | ||
【主权项】：
1.一种质粒载体，其特征在于，所述的质粒载体是带有Tol2转座子的DNA质粒载体，所述的质粒载体中还携带有牙鲆特异性的β‐actin启动子；所述的牙鲆特异性的β‐actin启动子，其核苷酸序列为SEQ ID NO:3。
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