[发明专利]一种雅龙鱼染色体制备方法

摘要

一种雅龙鱼染色体制备方法，它涉及一种鱼类染色体制备方法。本发明是为了解决血细胞培养法过小的鱼不容易采血、细胞培养过程长、培养条件高、培养难度大的技术问题。本方法：一、注射PHA、秋水仙素，制备细胞悬浮液，离心，加低渗液离心，弃上清液，得到细胞沉淀；二、固定；三、离心后的细胞沉淀加入卡诺氏固定液1‑1.2ml，混合均匀制成细胞悬液，将细胞悬液吸入胶头滴管内，在胶头滴管距离冷冻玻片25‑30cm、胶头滴管与冷冻玻片夹角为35‑50度的条件下滴加2‑3滴细胞悬液，然后将冷冻玻片在酒精灯火焰上方过3‑5次，均匀烘烤，室温下自然干燥，即得雅龙鱼染色体。本发明方法细胞培养时间短，培养容易，采用本发明方法获得的雅龙鱼染色体分裂相比较多，效果很好。

主权项

1.一种雅龙鱼染色体制备方法，其特征在于一种雅龙鱼染色体制备方法按照以下步骤进行：一、将体长10.20‑15.17cm、重量13.20‑37.56g、10月龄的雅龙鱼于水温为15℃±1℃的充气水族箱中饲养1周；二、按照PHA与鱼体重10μg:1g的比例给雅龙鱼注射PHA，16‑18h后，按秋水仙素溶液与鱼体重1‑2μg:g的比例再注射秋水仙素溶液，2‑4h后剪鳃断尾在水中放血，解剖鱼体，取出头肾，置于装有质量浓度为0.75％的生理盐水的平皿中清洗，清除血块后置于盛有生理盐水的培养皿中，用镊子将头肾组织磨碎，吸入10mL离心管中并用吸管反复吹打，加入生理盐水至5ml，混合均匀，以1000r/min的速度离心6min，弃掉上清液；三、向步骤二的产物中加入4mL低渗液，吹打均匀，室温静置、低渗处理40min，加入新配制的0.5‑1.0mL卡诺氏固定液，吹打均匀，再以1000r/min的速度离心6min，弃上清液，得到细胞沉淀；四、在细胞沉淀中加入0.5‑1.0mL卡诺氏固定液，吹打均匀，再加入2‑3mL卡诺氏固定液，室温静置固定15min后，再以1000r/min的速度离心6min，弃掉上清液；五、重复步骤四2次，弃掉上清液；六、将步骤五离心后的细胞沉淀加入卡诺氏固定液1‑1.2ml，混合均匀制成细胞悬液，将细胞悬液吸入胶头滴管内，在胶头滴管距离冷冻玻片25‑30cm、胶头滴管与冷冻玻片夹角为35‑50度的条件下滴加2‑3滴细胞悬液，然后将冷冻玻片在酒精灯火焰上方过3‑5次，均匀烘烤，室温下自然干燥，即得雅龙鱼染色体。