[发明专利]一种柑橘类果肉线粒体的分离纯化方法

摘要

本发明提供了一种柑橘果肉的线粒体分离纯化方法，涉及植物生物化学技术领域。本发明所述方法以Percoll为梯度介质应用差速离心结合密度梯度离心分离和纯化柑橘果肉线粒体，包括以下步骤：1)将柑橘果肉与缓冲液A混合后榨汁，过滤得过滤液；2)将得到的过滤液进行差速离心，得到的沉淀用缓冲液B进行悬浮，得到样品I；3)将得到的样品I进行密度梯度离心，得到样品II；4)将得到的样品II与缓冲液B混合，离心收集沉淀，得样品III；5)将得到的样品III与缓冲液B混合，离心收集沉淀，得柑橘果肉线粒体。本发明得到的线粒体呈典型的椭球状，双层膜结构完整，嵴清晰可见，且线粒体提纯方法纯度高，提纯效果好。

主权项

1.一种柑橘类果肉线粒体的分离纯化方法，包括以下步骤：1)将柑橘果肉与缓冲液A按照1g:1～5mL的料液比混合后榨汁，固液分离得过滤液；所述缓冲液A为包括以下成分的水溶液：0.3～0.5M的山梨醇、0.15～0.5M的3‑(N‑玛琳代)丙磺酸、1～10mM的乙二胺四乙酸、1～10mM的二硫苏糖醇、质量体积比为1～5％的聚乙烯吡咯烷酮和质量体积比为0.05～1％的牛血清蛋白；2)将步骤1)得到的过滤液进行差速离心，所述差速离心后得到的沉淀用缓冲液B进行悬浮，得到样品I；所述缓冲液B为包括以下成分的水溶液：0.3～0.5M的山梨醇和20～60mM的3‑(N‑玛琳代)丙磺酸；3)将步骤2)得到的样品I与用缓冲液C稀释的Percoll梯度稀释液混合，进行密度梯度离心，收集线粒体层，得到样品II；所述缓冲液C为包括以下成分的水溶液：0.6～1.0M的山梨醇和40～120mM的3‑(N‑玛琳代)丙磺酸；4)将步骤3)得到的样品II与所述缓冲液B混合，离心后收集沉淀，得样品III；5)将步骤4)得到的样品III与所述缓冲液B混合，离心后收集沉淀，得柑橘果肉线粒体。