[发明专利]一种新型提纯汞螯合型免疫复合物方法

摘要

本发明公开了一种新型提纯汞螯合型免疫复合物方法，包括以下步骤：步骤一：先将螯合剂溶液配制完成，再将螯合剂溶于溶剂中，即可得到螯合剂溶液，步骤二：取适量载体蛋白，将载体蛋白加入到硼酸盐缓冲溶液中，即可制得载体蛋白溶液，步骤三：将已制得的螯合剂溶液加入到载体蛋白溶液中，置于恒温水浴中并搅拌均匀，恒温水浴，即可得到混合液，步骤四：自制半透膜，步骤五：预提纯除去未螯合的汞离子和其它杂离子，步骤六：除去未结合的载体蛋白。本发明的提纯过程中部分用品自制，因此能够显著降低提纯成本，工作环境的要求更低，适用的范围更加广泛，使用复式层析柱有效减少提纯和纯化时间，一定程度上降低了成本。

主权项

1.一种新型提纯汞螯合型免疫复合物方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一：先将螯合剂溶液配制完成，再将螯合剂溶于溶剂中，即可得到螯合剂溶液；步骤二：取适量载体蛋白，将载体蛋白加入到硼酸盐缓冲溶液中，即可制得载体蛋白溶液；步骤三：将已制得的螯合剂溶液加入到载体蛋白溶液中，置于恒温水浴中并搅拌均匀，恒温水浴，即可得到混合液；步骤四：自制半透膜，向光滑、洁净、干燥的250ml锥形瓶中倒入火棉胶溶液，小心转动容器，使火棉胶溶液均匀附在壁上成一薄层，倾出多余的溶液，然后将容器倒置，进一步将多余溶液流尽和使溶剂乙醚挥发掉，直至用手指轻触所形成的膜而不粘着方可，然后往容器中加水至满为止，遇水后在乙醚未蒸发干的地方会发白，制成半透膜，将瓶口上的膜脱开，并在膜与容器壁间注入水，使膜自动脱离瓶壁，轻轻取出制成的袋形半透膜，检查是否有孔洞，如果有则不能使用，应重新制作，若以膜袋浸入不同浓度的乙醇水溶液中，则可得到不同渗透度的膜，按此法制作的半透膜不使用时，则应存放于水中，以免损坏；步骤五：预提纯除去未螯合的汞离子和其它杂离子，在将3‑5组半透膜按内外次序排列后加入EDTA溶液煮沸10min，弃废液后用ddH2O冲洗，重复该步骤2‑4次，步骤三中的混合液装入处理后的多层半透膜中，用ddH2O透析换水，4℃透析过夜之后，收集液体；步骤六：除去未结合的载体蛋白，取未使用的复式层析柱，用稀释缓冲液冲洗层析柱的管路，在上层层析柱中装入能与汞离子特异性结合的填料，在下层层析柱中装入能与载体蛋白特异性结合的填料，装柱后，继续使用稀释缓冲液K2HPO4平衡层析柱，待层析柱平衡后，用稀释缓冲液K2HPO4稀释步骤四中的样品，然后上柱，载体蛋白与填料特异性结合，使用稀释缓冲液K2HPO4冲洗层析柱至基线平衡，然后使用0.07‑0.1mol/L的磷酸盐溶液进行洗脱，收集得到的洗脱液，装入半透膜，用ddH2O透析，换水2‑4次后，4℃透析过夜，收集样本，即可得到高纯度的汞螯合型免疫复合物。