[发明专利]一种未使用缓冲液电转化感受态细胞的制备方法在审
| 申请号： | 201810607743.3 | 申请日： | 2018-06-13 |
| 公开（公告）号： | CN108588000A | 公开（公告）日： | 2018-09-28 |
| 发明（设计）人： | 曲东;燕飞 | 申请（专利权）人： | 陕西理工大学 |
| 主分类号： | C12N1/36 | 分类号： | C12N1/36;C12N1/20;C12R1/19 |
| 代理公司： | 北京高沃律师事务所 11569 | 代理人： | 刘奇 |
| 地址： | 723000 陕*** | 国省代码： | 陕西;61 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种未使用缓冲液电转化感受态细胞的制备方法，属于细菌分子遗传学技术领域，包括以下步骤：将大肠杆菌接种于含有镁离子的液体培养基中进行第一培养；将得到的第一培养物与液体培养基混合，再进行第二培养，将得到的第二培养物进行离心分离，得到沉淀；将沉淀与水混合，待沉淀悬起后进行离心分离，得到沉淀；将沉淀与水混合，待沉淀悬起后进行离心分离，得到沉淀，重复操作1次，得到沉淀；将沉淀与水混合，待沉淀悬起后进行离心分离，得到沉淀；将沉淀与水混合，待沉淀悬起后，与二甲基亚砜混匀，得到电转化感受态细胞。采用本发明的制备方法能够获得高转化率的感受态细胞且操作简单、制备成本低。 | ||
| 搜索关键词： | 沉淀 水混合 电转化感受态细胞 制备 液体培养基 缓冲液 培养物 未使用 大肠杆菌 二甲基亚砜 感受态细胞 遗传学技术 高转化率 细菌分子 重复操作 镁离子 混匀 接种 | ||
【主权项】：
1.一种未使用缓冲液电转化感受态细胞的制备方法，包括以下步骤：1)将大肠杆菌接种于含有镁离子的LB液体培养基中进行第一培养，得到第一培养物；2)将所述步骤1)得到的第一培养物与LB液体培养基混合，至OD600值为0.08～0.10时进行第二培养，至OD600值为0.35～0.40时，得到第二培养物；3)将所述步骤2)得到的第二培养物进行第一离心分离，弃去上清液后得到第一沉淀；所述第一离心分离的时间为15～25min；4)将所述步骤3)得到的第一沉淀与水混合，待所述第一沉淀悬起后进行第二离心分离，弃去上清液后得到第二沉淀；所述第二离心分离的时间为10～20min；5)将所述步骤4)得到的第二沉淀与水混合，待所述第二沉淀悬起后进行第三离心分离，弃去上清液后得到第三沉淀；所述第三离心分离的时间为5～15min；6)重复步骤5)1次，得到第四沉淀；7)将所述步骤6)得到的第四沉淀与水混合，待所述第四沉淀悬起后进行第五离心分离，弃去上清液后得到第五沉淀；所述第五离心分离的时间为5～15min；8)将所述步骤7)得到的第五沉淀与水混合，待所述第五沉淀悬起后，与二甲基亚砜混匀，得到电转化感受态细胞。
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