[发明专利]一种精华素及其精华素和复合干细胞因子冻干粉的制备方法

摘要

本发明涉及一种精华素及其精华素和复合干细胞因子冻干粉的制备方法。本发明通过脐带间充质干细胞上清液的提取，获得了复合干细胞因子，然后细胞传代培养得到第三代细胞汇合率达到70％‑80％时离心后的上清液加入海藻糖过滤，最后用冻干机冷冻得到复合干细胞冻干粉，本发明制备的微乳精华液与复合干细胞冻干粉按比例混合制成精华素。本发明利用脐带间充质干细胞在培养过程中既能产生刺激纤维母细胞，以促进胶原蛋白及弹力纤维的增生细胞因子，又能产生补充有效成分提升肌肤更新能力预防细胞提早损坏或衰老的细胞因子和活性蛋白，本发明的微乳精华液不但能溶解水溶性的功效成分，也能溶解脂溶性的功效成分，使得利用本发明制成的精华素更亲和肌肤。

主权项

1.一种复合干细胞因子冻干粉的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：A.将新生儿的脐带转移到无菌培养皿中，加入PBS缓冲液，浸泡至脐带发白无血迹；B.取步骤A中浸泡过的脐带，将其剪成1‑10cm的脐带，将所述脐带的1根脐静脉、2根脐动脉和脐带外表皮剥离丢弃，保留剩下的华通氏胶部分；C.取步骤B的华通氏胶，将所述华通氏胶剪碎成0.5‑2mm3的小块；D.将步骤C中的华通氏胶小块铺设于新的培养皿底部，华通氏胶小块间的距离为0‑5mm；E.在步骤D的培养皿中加入0.5‑1.5mL无血清培养基，倒置培养皿，然后将培养皿放到饱和湿度培养箱中，在30℃‑40℃的温度下，采用体积份数为4‑6％二氧化碳的环境下培养1‑2天；F.将步骤E培养后的培养皿翻转正置，向培养皿中补充完全培养基8‑12mL，然后将培养皿放到饱和湿度培养箱中，在30℃‑40℃的温度下，采用4％‑6％二氧化碳的环境下培养6‑11天；G.将步骤F中培养皿中的培养基进行全量换液，吸取原培养基，将原培养基收集到无菌储液瓶当中，然后在培养皿中加入新鲜的培养基；H.每2‑4天重复步骤G，直到细胞生长至80％融合时为止；I.将步骤H中的培养皿中的华通氏胶小块和非贴壁细胞弃去，用工程化重组胰蛋白酶消化液消化细胞，按1：5比例传代，每2‑4天重复步骤G的操作，直到传代到第三代细胞汇合率达到70％‑80％时终止重复步骤G的操作；J.将步骤I得到的培养皿中的培养液转移到离心管中，在1800‑2300r/min的转速下离心9‑11min；K.取步骤J中得到的上清液，加入海藻糖，搅拌溶解；L.将步骤A配制的复合上清液转移至生物安全柜中，使用0.4‑0.5μm的滤器过滤上清液，得到的滤液再用0.2‑0.25μm的滤器过滤，得到的滤液存储在硬质冻干瓶中；M.将步骤L的硬质冻干瓶使用冷冻机冷冻,得复合干细胞因子冻干粉。