[发明专利]一种非组织培养的玉米遗传转化方法

摘要

本发明公开了一种非组织培养的玉米遗传转化方法，包括以下步骤：S1、将含目的基因的质粒导入农杆菌感受态细胞；S2、玉米幼胚的制备；S3、将农杆菌细胞稀释到LB液体培养基中将玉米幼胚完全浸泡在LB培养基中；S4、将玉米幼胚取出，并放置在MS培养基上，黑暗条件下培养2‑3天后，再将在MS培养基上长势良好的玉米幼胚转移到新的MS培养基上，重复2‑3次；S5、将玉米幼胚移栽到营养土中，温室中培养；S6、待玉米幼胚长成幼苗后，取玉米叶片并提取质粒后用PCR方法进行检测。本发明可以避免组织培养过程，不受基因型的限制，简便、高效、规模化的转化体系，促进更多的基因工程品种应用于生产，进而推动当前农作物生物工程的发展。

主权项

1.一种非组织培养的玉米遗传转化方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、将含目的基因的质粒导入农杆菌感受态细胞：取2ul含目的基因的质粒于0.2ulEP管中，向质粒中加入20ul的农杆菌感受态细胞，轻柔混匀内容物盖好管盖，在冰中静置5min后放入液氮中放置5min，接着37℃放置5min，快速将EP管转移到冰浴中，使细胞冷却5min，向每支EP管加入100μl不含抗生素的LB液体培养基，将0.2ulEP管转移到28℃摇床，培育2‑3h使抗性基因表达，此时取出含利福平和链霉素的LB固体培养基放置到超净工作台中，重悬菌液，取60ul将其涂于含利福平和链霉素的LB固体培养基上，放置晾干，将平板倒置于28℃培养箱中，培养2d；S2、玉米幼胚的制备：取授粉后10d‑15d的玉米幼穗，用无菌水冲洗2‑3遍后用75％的乙醇浸泡3min‑5min，浸泡取出后用无菌水冲洗5遍，剥取幼胚后备用；S3、将农杆菌细胞稀释到LB液体培养基中，使得含农杆菌细胞的LB培养基的OD600为0.4‑0.8，将玉米幼胚完全浸泡在LB培养基中，摇晃培养20min‑30min；S4、将玉米幼胚取出，并放置在MS培养基上，黑暗条件下培养2‑3天后，再将在MS培养基上长势良好的玉米幼胚转移到新的MS培养基上，重复2‑3次；S5、将玉米幼胚移栽到营养土中，温室中培养；S6、待玉米幼胚长成幼苗后，取玉米叶片并提取质粒后用PCR方法进行检测。