[发明专利]一种Adgrv1基因Y6236fsX1突变动物模型的构建方法有效

专利信息
申请号: 201810635308.1 申请日: 2018-06-20
公开(公告)号: CN108866102B 公开(公告)日: 2021-11-16
发明(设计)人: 徐志刚;杜海波;王燕飞 申请(专利权)人: 山东大学深圳研究院;山东大学
主分类号: C12N15/90 分类号: C12N15/90;C12N9/22;A01K67/027
代理公司: 济南圣达知识产权代理有限公司 37221 代理人: 李健康
地址: 518057 广东省深圳市南山区高新*** 国省代码: 广东;44
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摘要: 发明公开了一种基于CRISPR/Cas9技术的Adgrv1基因Y6236fsX1突变动物模型的构建方法,步骤是(1)设计并选择合适的靶向小鼠Adgrv1基因的Guide RNA及修复模板DNA;(2)体外合成Cas9 mRNA、Guide RNA和修复模板DNA;(3)将Guide RNA、Cas9 mRNA和修复模板DNA等摩尔比共同配制成注射样品对受精卵注射;(4)对获得的F0代小鼠进行鉴定;(5)阳性F0代小鼠传代及F1代小鼠的获得与鉴定。本方法可以成功获得与人类中Y6244fsX1致病突变对应的Adgrv1基因Y6236fsX1突变小鼠模型,为研究人类中Y6244fsX1致病突变的相关因素和诊断治疗提供了基础。
搜索关键词: 一种 adgrv1 基因 y6236fsx1 突变 动物 模型 构建 方法
【主权项】:
1.一种基于CRISPR/Cas9技术的Adgrv1基因Y6236fsX1突变动物模型的构建方法,步骤是:(1)在小鼠Adgrv1基因89号外显子上6236位点Tyrosine附近设计合适的Guide RNA;其中Guide RNA target site1的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示,Guide RNA target site2的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示;设计合适的修复模板DNA以产生Y6236fsX1突变;其中修复模板DNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示;(2)体外合成Guide RNA、Cas9 mRNA和修复模板DNA;(3)将Guide RNA、Cas9 mRNA与修复模板DNA等摩尔比共同配制成100ul注射样品,并将样品注射到取自C57BL/6J母鼠受精卵的雄原核中,培养恢复后移植入假孕受体小鼠,等待获得的F0代小鼠;(4)利用PCR反应体系对获得的F0代小鼠进行鉴定;(5)将阳性F0代小鼠与野生型C57BL/6J交配获得F1代小鼠,筛选出的阳性F1代小鼠即为Adgrv1基因Y6236fsX1突变动物模型小鼠。
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