[发明专利]一种Adgrv1基因Y6236fsX1突变动物模型的构建方法有效
申请号: | 201810635308.1 | 申请日: | 2018-06-20 |
公开(公告)号: | CN108866102B | 公开(公告)日: | 2021-11-16 |
发明(设计)人: | 徐志刚;杜海波;王燕飞 | 申请(专利权)人: | 山东大学深圳研究院;山东大学 |
主分类号: | C12N15/90 | 分类号: | C12N15/90;C12N9/22;A01K67/027 |
代理公司: | 济南圣达知识产权代理有限公司 37221 | 代理人: | 李健康 |
地址: | 518057 广东省深圳市南山区高新*** | 国省代码: | 广东;44 |
权利要求书: | 查看更多 | 说明书: | 查看更多 |
摘要: | 本发明公开了一种基于CRISPR/Cas9技术的Adgrv1基因Y6236fsX1突变动物模型的构建方法,步骤是(1)设计并选择合适的靶向小鼠Adgrv1基因的Guide RNA及修复模板DNA;(2)体外合成Cas9 mRNA、Guide RNA和修复模板DNA;(3)将Guide RNA、Cas9 mRNA和修复模板DNA等摩尔比共同配制成注射样品对受精卵注射;(4)对获得的F0代小鼠进行鉴定;(5)阳性F0代小鼠传代及F1代小鼠的获得与鉴定。本方法可以成功获得与人类中Y6244fsX1致病突变对应的Adgrv1基因Y6236fsX1突变小鼠模型,为研究人类中Y6244fsX1致病突变的相关因素和诊断治疗提供了基础。 | ||
搜索关键词: | 一种 adgrv1 基因 y6236fsx1 突变 动物 模型 构建 方法 | ||
【主权项】:
1.一种基于CRISPR/Cas9技术的Adgrv1基因Y6236fsX1突变动物模型的构建方法,步骤是:(1)在小鼠Adgrv1基因89号外显子上6236位点Tyrosine附近设计合适的Guide RNA;其中Guide RNA target site1的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示,Guide RNA target site2的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示;设计合适的修复模板DNA以产生Y6236fsX1突变;其中修复模板DNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示;(2)体外合成Guide RNA、Cas9 mRNA和修复模板DNA;(3)将Guide RNA、Cas9 mRNA与修复模板DNA等摩尔比共同配制成100ul注射样品,并将样品注射到取自C57BL/6J母鼠受精卵的雄原核中,培养恢复后移植入假孕受体小鼠,等待获得的F0代小鼠;(4)利用PCR反应体系对获得的F0代小鼠进行鉴定;(5)将阳性F0代小鼠与野生型C57BL/6J交配获得F1代小鼠,筛选出的阳性F1代小鼠即为Adgrv1基因Y6236fsX1突变动物模型小鼠。
下载完整专利技术内容需要扣除积分,VIP会员可以免费下载。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息,商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于山东大学深圳研究院;山东大学,未经山东大学深圳研究院;山东大学许可,擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作,请联系【客服】
本文链接:http://www.vipzhuanli.com/patent/201810635308.1/,转载请声明来源钻瓜专利网。
- 上一篇:人源化IL-6和IL-6受体
- 下一篇:一种大豆发酵代谢物及其应用