[发明专利]利用碱基编辑技术实现基因敲除的方法及其应用有效
| 申请号： | 201810635413.5 | 申请日： | 2018-06-20 |
| 公开（公告）号： | CN108753823B | 公开（公告）日： | 2022-09-23 |
| 发明（设计）人： | 李广磊;谈方志;王鑫杰 | 申请（专利权）人： | 李广磊 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N5/10 |
| 代理公司： | 北京迎硕知识产权代理事务所(普通合伙) 11512 | 代理人： | 张群峰;钱扬保 |
| 地址： | 252411 山东省*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | 利用碱基编辑技术实现基因敲除的方法及其应用。该基因敲除方法包括：选定待敲除基因的编码区的20bp‑NGG目标序列，使其包含完整的目标密码子CAA、CAG或CGA；利用sgRNA序列将碱基编辑系统定位到目标序列以使目标密码子中的单碱基C变成T，从而引入终止密码子TAA、TAG或TGA以实现基因敲除，其中目标单碱基C位于目标序列的第3‑8位。所述sgRNA序列为与目标序列互补对应的20bp序列。本方法在原代细胞或者高甲基化区域仍然具有较高活性，因此本发明的敲除方法更高效、更精确、更少脱靶以及适用范围更广，为基因敲除提供了一种更先进的方法。 | ||
| 搜索关键词： | 利用 碱基 编辑 技术 实现 基因 方法 及其 应用 | ||
【主权项】：
1.一种利用碱基编辑实现基因敲除的方法，包括：选定待敲除基因编码区的20bp–NGG目标序列，使其包含完整的目标密码子CAA、CAG或CGA；利用sgRNA序列来将h‑PHRBN‑BE定位到目标序列以使目标密码子中的目标单碱基C变成T从而相应引入终止密码子TAA、TAG或TGA以实现基因敲除，其中，PHRBN是来自人的碱基编辑酶PHRBN(APOBEC‑3A)，通过将PHRBN融合到切口酶形式的Cas9核酸酶(D10A)的N端而靶向位点为目标序列的第3‑8位的目标单碱基C，所述sgRNA序列为与目标序列互补对应的20bp序列。
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