[发明专利]通用隔断超快扩增镁、钠切割型功能核酸可视化检测方法

摘要

本发明提供一种通用隔断超快扩增的镁、钠切割型功能核酸可视化检测方法。本发明通过巧妙地设计引物、模板及探针，使得在镁、钠离子存在下可对模板进行超快扩增，并使扩增产物在适宜环境中形成G四链体。进一步利用G四链体的类过氧化物酶活性进行显色，解决了传统PCR产物难于可视化检测的难题，实现了对镁、钠离子的快速、可视化检测。不仅如此，本发明提供的方法对镁、钠离子具有高特异、高灵敏的特点，检测结果更加客观、准确。

主权项

1.一种快速检测镁、钠离子的系统，其特征在于，包括：(1)切割体系，(2)sPCR扩增体系，(3)HCR体系，(4)包含ABTS显色液的检测体系；所述检测体系用于对待测样品依次经由所述切割体系、sPCR扩增体系和HCR体系进行反应后所得产物进行显色检测；其中，所述切割体系包括底物链I和酶链I以及底物链II和酶链II：底物链I：5′‑CTCTATCTATrA‑GGAAGTACCGCCGC‑3′酶链I：5′‑GCGGCGGTACCAGGTCAAAGGTGGGTGAGGGGACGCCAAGAGTCCCCGCGGTTAGATAGAG‑3′其中，rA表示核糖核酸；‑表示钠离子切割位点；底物链II：5′‑GTCACGAGTCACTATrA‑GGAAGATGGCGAAA‑3′酶链II：5′‑TTTCGCCATCTTCTCCGAGCCGGTCGAAATAGTGACTCGTGAC‑3′其中，rA表示核糖核酸；‑表示镁离子切割位点；所述sPCR扩增体系包括：正向隔断引物I、反向引物I、正向隔断引物II、反向引物II、模板：正向隔断引物I：5′‑AGACGAAGCACTGGTTGAAACTCC‑隔断物‑GGAGTTTCAACCAGTGCTTCGTCTTCATCGCACCGTCAAAGGAACC‑3′反向引物I：5′‑GGAAGTACCGCCGCGGAGGGA‑3′正向隔断引物II：5′‑AGTCTAGGATTCGGCGTCCCTTAA‑隔断物‑TTAAGGGACGCCGAATCCTAGACTTCATCGCACCGTCAAAGGAACC‑3′反向引物II：5′‑GGAAGATGGCGAAATTCGGGGC‑3′模板：5′‑TCATCGCACCGTCAAAGGAACCTCAGTATCAGTGCTATACGTCGATCAGTAGCCCCGAATTTCGCCATCTTCCTCCCTCCGCGGCGGTACTTCC‑3′；所述HCR体系包括4条探针：探针1：5′‑AGGGCGGGTGGGTGGAGTTTCAACCAGTGCTTCGTCTCCCCAGACGAAGCACTGGTTGATGGGT‑3′探针2：5′‑TGGGTAGACGAAGCACTGGTTGAAACTCCTCAACCAGTGCTTCGTCTGGGGTGGGTAGGGCGGG‑3′探针3：5′‑AGGGCGGGTGGGTTAAGGGACGCCGAATCCTAGACTCAAAGTAGTCTAGGATTCGGCGTCGGGT‑3′探针4：5′‑GGGTAGTCTAGGATTCGGCGTCCCTTAAGACGCCGAATCCTAGACTACTTTGAGGGCGGGTGGG‑3′。