[发明专利]一种特异性检测百合黄瓜花叶病毒的试剂盒及其检测方法

摘要

一种特异性检测百合黄瓜花叶病毒CMV的IC‑RT‑LAMP试剂盒及其检测方法，试剂盒主要包括特异性CMV抗体IgG、特异性RT反向引物CMV‑R、特异性LAMP引物组、第一链cDNA合成试剂、LAMP扩增反应试剂、荧光染料检测液、阴性对照品和阳性对照品；特异性LAMP引物组由正向外引物F3、反向外引物B3、正向内引物FIP、反向内引物BIP、正向环引物LF和反向环引物LB组成；阴性对照品为ddH2O，阳性对照品为兰州百合CMV CP基因标准品；本发明不用提取RNA，不需要酶标仪、PCR仪或荧光定量PCR仪等分子生物学专业仪器设备，在恒温水浴中即能完成扩增反应，特异性和灵敏度高，操作简便，适用性强，可用于监控百合CMV病毒的发生、扩散和流行，适合在基层推广应用。

主权项

1.一种特异性检测百合黄瓜花叶病毒CMV的IC‑RT‑LAMP试剂盒，包括特异性CMV抗体IgG、特异性RT反向引物CMV‑R、特异性LAMP引物组、第一链cDNA合成试剂和LAMP扩增反应试剂，所述特异性LAMP引物组包括正向外引物F3、反向外引物B3、正向内引物FIP、反向内引物BIP、正向环引物LF和反向环引物LB，所述特异性RT反向引物CMV‑R以及LAMP引物组的序列如下：CMV‑R：5’‑ CACTCCGGACGTGGGAATAC ‑3’F3：5’‑GCCTCACCGGTACTGGTT‑3’B3：5’‑ GACGTGGGAATACGTTGGT ‑3’FIP：5’‑ CCTATATCAGCGCGCATCGCCATCAGTACGCTGCATCTGGA ‑3’BIP：5’‑TGAGAAAGTACGCCGTCCTCGTGCTCGACGTCAACATGAAGT‑3’LF：5’‑ CAACAGTTTGTTGTTAGCTTGGAC ‑3’LB：5’‑ GTATTCAAAAGACGATGCACTCGA ‑3’其特征在于：所述试剂盒还包括CMV抗体IgG 包被缓冲液（CB）、磷酸缓冲液（PBS）、磷酸洗涤缓冲液（PBST）、SYBR Green I荧光染料检测液、阴性对照品和阳性对照品，所述阴性对照品为ddH2O；所述阳性对照品为兰州百合CMV CP基因标准品；所述阳性对照品序列如下：兰州百合CMV CP基因标准品：TTCCTGCCTCCTCGGACTTATCCGTTGCCGCCATCTCTGCTATGTTTGCGAACGGAGCCTCACCGGTACTGGTTTATCAGTACGCTGCATCTGGAGTCCAAGCTAACAACAAACTGTTGTATGATCTTTCGGCGATGCGCGCTGATATAGGCGACATGAGAAAGTACGCCGTCCTCGTGTATTCAAAAGACGATGCACTCGAGACAGACGAGTTAGTACTTCATGTTGACGTCGAGCACCAACGTATTCCCACGTCCGGAGTG。