[发明专利]一种同步检测猪五种繁殖障碍性病毒病多重PCR体系及检测方法

摘要

本发明公开了一种同步检测猪五种繁殖障碍性病毒病多重PCR体系及检测方法，该方法的建立一方面可应用于临床样品的检测，另一方面为多重PCR诊断方法的建立奠定了基础。其技术方案如下：设计CSFV、PPV、PRRSV、JEV及PCV2特异性引物，提取病毒DNA和RNA，并将RNA进行反转录。随后，对设计的引物进行PCR反应条件的优化，确立最佳多重PCR反应体系及反应程序。按照最佳多重PCR反应条件进行试验，对该方法的特异性、敏感性及稳定性进行验证，同时进行临床样品检测以验证此方法操作的可行性。本发明不仅保留了常规PCR的高度特异性、敏感性，又减少了操作步骤，实现了一次扩增可同时检测多种微生物的目的，大大节省了时间，节约了经费开支。

主权项

1.一种同步检测猪五种繁殖障碍性病毒病多重PCR体系的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：1)PPV和PCV2病毒DNA的提取；2)CSFV、PRRSV和JEV病毒RNA的提取以及反转录；3)特异性引物设计与筛选；4)对步骤3)所设计的特异性引物进行PCR反应条件优化，从而建立最佳多重PCR反应体系；5)按照步骤4)建立的最佳多重PCR反应体系进行多重PCR扩增特异性验证；6)按照步骤4)建立的最佳多重PCR反应体系进行多重PCR敏感性验证；7)按照步骤4)建立的最佳多重PCR反应体系进行多重PCR稳定性验证；8)按照建立的多重PCR方法对临床样品的检测，以验证该方法的可行性。