[发明专利]重组微生物源天然虾青素基因工程菌及其产物的制备方法在审
| 申请号： | 201810658540.7 | 申请日： | 2018-06-25 |
| 公开（公告）号： | CN108998465A | 公开（公告）日： | 2018-12-14 |
| 发明（设计）人： | 胡向东;叶茂;胡伟卿 | 申请（专利权）人： | 浙江皇冠科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/81 | 分类号： | C12N15/81;C12P23/00;C12R1/865 |
| 代理公司： | 北京国翰知识产权代理事务所(普通合伙) 11696 | 代理人： | 卫翠婷 |
| 地址： | 310012 浙江省杭*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明公开了重组微生物源天然虾青素基因工程菌及其产物的制备方法，该工程菌的制备方法包括基因扩增、制备克隆质粒、制备重组表达质粒、制备重组微生物源天然虾青素基因工程菌。工程菌产物的制备方法为：将活化后工程菌进行一级种、二级种摇瓶培养、酵罐培养，培养结束后收集菌体，避光下加入STET缓冲液和溶菌酶，搅拌均匀后置于水浴中，细胞裂解液裂解，离心上清加入异丙醇沉降，用无菌水溶解离心沉淀，冷冻干燥，即得重组虾青素。有益效果为：本发明该工程菌生长繁殖迅速、能成功表达出重组虾青素蛋白，表达量高、产量高，得到的重组虾青素为3S,3'S构型，工程菌发酵制备重组虾青素的产量高、效率高，大大节省人力物力成本。 | ||
| 搜索关键词： | 制备 工程菌 虾青素 基因工程菌 天然虾青素 重组微生物 重组表达质粒 细胞裂解液 基因扩增 克隆质粒 离心沉淀 人力物力 收集菌体 摇瓶培养 沉降 表达量 二级种 缓冲液 溶菌酶 无菌水 异丙醇 避光 活化 酵罐 裂解 水浴 发酵 溶解 蛋白 繁殖 生长 成功 | ||
【主权项】：
1.重组微生物源天然虾青素基因工程菌的制备方法，包括基因扩增、制备克隆质粒、制备重组表达质粒、制备重组微生物源天然虾青素基因工程菌，其特征在于：所述基因扩增步骤为：提取P.agglomerans的基因组DNA，PCR扩增crtE、crtB、crtI、crtY基因编码框，同时提取红法夫酵母的总RNA，逆转录成cDNA模版，PCR扩增crtS、crtR基因编码区。
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