[发明专利]一种鱼骨类加工下脚料中提取胶原蛋白和硫酸软骨素的方法

摘要

本发明提供一种鱼骨类加工下脚料中提取胶原蛋白和硫酸软骨素的方法，是从水产骨类加工下脚料中综合提取胶原蛋白和硫酸软骨素，提取的到的胶原蛋白含量和硫酸软骨素的含量均达到90％以上，实现了鱼骨类下脚料的高质化利用。本发明以鱼骨类加工下脚料为原料，高值化利用加工下脚料。既节约了资源、保护了环境。本发明改进过去单独提取鱼骨中胶原蛋白或硫酸软骨素的方法，提高了资源利用率，还用较为高效、快捷、温和的方法提取胶原蛋白和硫酸软骨素，使其保持较高产量的同时保持较好的生物活性。本发明中提取的胶原蛋白和硫酸软骨素的纯度较高，最后得物中胶原蛋白和硫酸软骨素的含量均达到90％以上。

主权项

1.一种鱼骨类加工下脚料中提取胶原蛋白和硫酸软骨素的方法，其特征在于，所述的方法包括如下的步骤：1)原料预处理取鱼的加工下脚料，放入到2‑4倍质量的水中，加入胰蛋白酶和中性蛋白酶，在40‑50℃水浴6‑12h；将酶解得到的鱼骨放入‑80℃预冷12‑24h，然后进行粉碎；将粉碎物加入0.5mol/L的乙二胺四乙酸二钠溶液中，调节pH值至7.2‑8.0，在4℃条件下搅拌3‑5d，搅拌期间每天更换乙二胺四乙酸二钠溶液；搅拌结束后，将粉碎物用蒸馏水洗涤后，用0.1mol/L的NaOH溶液在4℃条件下搅拌2‑4d，搅拌期间每天更换NaOH溶液；用蒸馏水洗涤后，用10％的异丙醇溶液在4℃条件下搅拌2‑4d，再用蒸馏水进行洗涤后获得预处理后的粉碎物；2)胶原蛋白的提取将步骤1)获得的预处理后的粉碎物加入到0.5mol/L的冰醋酸溶液中、再加入胃蛋白酶，在4℃条件下搅拌提取3‑5d，然后在8000‑10000r/min离心30min，得上清液鱼骨酶溶性胶原蛋白粗提液和沉淀；在上清液中缓慢加入研磨过的NaCL粉末，至上清液中氯离子最终浓度为0.8‑1.5mol/L，静置过夜，然后在8000‑10000r/min离心得到白色絮状物；将上述白色絮状物复溶于0.5mol/L的冰醋酸溶液中，在4℃条件下，先用0.1mol/L醋酸溶液透析1‑2d，再用蒸馏水透析2‑4d，直至透析液电导率不变，重复上述盐析过程三次，得到胶原蛋白溶液，将其冷冻干燥后，得鱼骨酶溶性胶原蛋白；3)硫酸软骨素提取将步骤2)所获得的沉淀加入到NaCL浓度为10‑25％溶液中，调节溶液pH值至8‑10；加入胰蛋白酶，在30‑50℃恒温搅拌提取6‑18h；提取液过滤得到滤液；在所得滤液中不断搅拌加乙醇至溶液体系中乙醇体积分数为90‑150％，静置12‑24h，收集沉淀物用无水乙醇洗涤；将沉淀物用蒸馏水复溶，在8000‑10000r/min离心30min，用蒸馏水透析3‑5天，直至透析液电导率不变得硫酸软骨素溶液，将溶液在30‑60℃条件下进行旋转蒸发，再将其冷冻干燥后，得硫酸软骨素。