[发明专利]牛贾第虫、隐孢子虫多重PCR检测试剂盒及其方法在审
申请号: | 201810693144.8 | 申请日: | 2018-06-29 |
公开(公告)号: | CN108796106A | 公开(公告)日: | 2018-11-13 |
发明(设计)人: | 宫鹏涛;张西臣;高宇航;李显赫;任文陟;李建华;杨举 | 申请(专利权)人: | 吉林大学 |
主分类号: | C12Q1/6893 | 分类号: | C12Q1/6893;C12Q1/686 |
代理公司: | 吉林长春新纪元专利代理有限责任公司 22100 | 代理人: | 陈宏伟 |
地址: | 130011 吉*** | 国省代码: | 吉林;22 |
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摘要: | 本发明公开一种牛贾第虫、隐孢子虫多重PCR检测试剂盒及其方法,根据十二指肠贾第虫TPI基因、微小隐孢子虫18S rRNA基因与安氏隐孢子虫18S rRNA基因的部分保守序列设计引物,建立三重PCR检测方法,通过优化PCR反应的退火温度等反应条件来提高其灵敏性和准确性,扩增产物经1.0%琼脂糖凝胶电泳后观察结果方便、快捷。本发明扩增的三种目的片段在琼脂糖凝胶电泳中大小差异显著,易于区分,且敏感性可达到1×103/g粪便,高于三种寄生虫已报导的镜检法与常规PCR检测方法,适合于临床实践中样本的检测。本发明检测方法可以同时快速检测牛的十二指肠贾第虫、微小隐孢子虫与安氏隐孢子虫,具有操作简单、灵敏度高、特异性强等特点。同时为实验用实牛的质量标准提供技术支持。 | ||
搜索关键词: | 琼脂糖凝胶电泳 安氏隐孢子虫 微小隐孢子虫 多重PCR检测 检测 十二指肠 隐孢子虫 试剂盒 退火 保守序列 大小差异 反应条件 技术支持 快速检测 扩增产物 目的片段 设计引物 特异性强 质量标准 寄生虫 常规PCR 三重PCR 基因 镜检法 灵敏度 灵敏性 实验用 扩增 粪便 样本 优化 | ||
【主权项】:
1.用于扩增牛十二指肠贾第虫、微小隐孢子虫、安氏隐孢子虫的nest‑PCR扩增引物,具有以下序列:十二指肠贾第虫PCR引物:F1 :5'‑CGACCTGACTATGACCAACTC‑3';R1 :5'‑GTCCTGAAGCATCTCAACACT‑3';微小隐孢子虫PCR引物:F2:5'‑CCTTACTCCTTCAGCACCTTATG‑3';R2 :5'‑TGTTACGACTTCTCCTTCCTCTAA‑3';安氏隐孢子虫PCR引物:F3:5'‑TACCGTGGCTATGACGGGTA‑3';R3:5'‑CACCAGACTTGCCCTCCAAT‑3';所述的牛十二指肠贾第虫特异基因序列如SEQ No.1所示;所述的微小隐孢子虫特异基因序列如SEQ No.4所示;所述的安氏隐孢子虫特异基因序列如SEQ No.7所示。
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