[发明专利]一种弹性蛋白酶及其提取方法有效
| 申请号： | 201810708915.6 | 申请日： | 2018-07-02 |
| 公开（公告）号： | CN108642031B | 公开（公告）日： | 2022-01-07 |
| 发明（设计）人： | 张革;唐章勇;刘荣春;肖勇;李先锋 | 申请（专利权）人： | 四川德博尔制药有限公司 |
| 主分类号： | C12N9/66 | 分类号： | C12N9/66 |
| 代理公司： | 北京超凡志成知识产权代理事务所(普通合伙) 11371 | 代理人： | 葛松生 |
| 地址： | 618000 四川*** | 国省代码： | 四川;51 |
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| 摘要： | 本发明涉及生物制药技术领域，提供了弹性蛋白酶的提取方法：将猪胰脏肉浆与0.1～0.5M、pH为4.0～7.0的第一磷酸盐缓冲液反应充分后，进行固液分离得初级提取液；将初级提取液过超滤膜得到次级提取液；用0.02～0.1M、pH为4.5～6.5的第二磷酸盐缓冲液平衡装有CM Bestarose FF的层析柱；调节次级提取液的pH后过滤得到上样液；将上样液以2～4ml/min的速度过柱；上样完毕后用第二磷酸盐缓冲液洗涤；用0.5～1.2M、pH为4.5～6.5的第三磷酸盐缓冲液洗脱，收集洗脱液；用超滤膜得弹性蛋白酶液。该方法制得的弹性蛋白酶品质高。本发明还提供了通过上述方法制得的弹性蛋白酶。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 弹性 蛋白酶 及其 提取 方法 | ||
【主权项】：
1.一种弹性蛋白酶的提取方法，其特征在于，包括如下步骤：提取步骤：将猪胰脏肉浆与其质量1～10倍浓度为0.1～0.5M、pH为4.0～7.0的第一磷酸盐缓冲液混合，使所述猪胰脏肉浆与所述第一磷酸盐缓冲液充分反应后，进行固液分离得初级提取液；脱盐步骤：将所述初级提取液过3000～20000Da的分子量超滤膜浓缩脱盐得到电导小于5ms的次级提取液；树脂平衡步骤：用浓度为0.02～0.1M、pH为4.5～6.5的第二磷酸盐缓冲液平衡装有CM Bestarose FF的层析柱；上样液制备步骤：调节所述次级提取液的pH至与所述第二磷酸盐缓冲液的pH相同后过滤得到上样液；上样步骤：将所述上样液以2～4ml/min的速度过柱；洗涤步骤：上样完毕后用第二磷酸盐缓冲液洗涤1～5个柱体积；洗脱步骤：用浓度0.5～1.2M、pH为4.5～6.5的第三磷酸盐缓冲液洗脱2～8个柱体积，收集洗脱液；脱盐步骤：用3000～20000Da分子量超滤膜浓缩脱盐至电导小于500us得弹性蛋白酶液。
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