[发明专利]一种测定人外周血中次黄嘌呤单核苷酸脱氢酶活性的方法在审
| 申请号： | 201810711798.9 | 申请日： | 2018-06-29 |
| 公开（公告）号： | CN110658269A | 公开（公告）日： | 2020-01-07 |
| 发明（设计）人： | 焦正;刘飞燕;盛长城;徐璐扬 | 申请（专利权）人： | 复旦大学附属华山医院 |
| 主分类号： | G01N30/02 | 分类号： | G01N30/02;G01N30/74;G01N30/06 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 200031*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明属医学检验领域，涉及体内酶活性的分析测定方法，具体涉及一种测定人外周血中次黄嘌呤单核苷酸脱氢酶活性的方法。本发明方法包括，对人血样经外周血单个核细胞提取及体外酶促反应后，液相色谱柱分离后，用紫外检测器进行检测。该法样品取样少，测定速度快，专属性强，分析结果准确，精密度高，可适用于临床上次黄嘌呤单核苷酸脱氢酶抑制药物的药效学研究，以及有助于促进相关药物的个体化给药。 | ||
| 搜索关键词： | 单核苷酸 外周血单个核细胞 体外酶促反应 个体化给药 脱氢酶活性 液相色谱柱 紫外检测器 次黄嘌呤 分析测定 人外周血 医学检验 抑制药物 黄嘌呤 人血样 体内酶 脱氢酶 药效学 专属性 取样 检测 研究 | ||
【主权项】：
1.一种测定人外周血中次黄嘌呤单核苷酸脱氢酶(IMPDH)酶活性的方法，其特征在于，其包括，血样经外周血单个核细胞(PBMC)提取和体外酶促反应后，采用高效液相色谱HPLC分离及紫光检测器检测，计算IMPDH酶活性：包括以下步骤：/n1)样品预处理/nPBMC提取：取肝素抗凝外周血，使用淋巴细胞分离液进行细胞提取，PBS缓冲液清洗后得到PBMC细胞沉淀，-80℃冻存。/n体外酶促反应：取冻存PBMC细胞于室温融解，加入孵育液进行体外酶促反应，终止反应后离心取上清液进样；/n2)样品分离与测定/n采用极性的C18柱(CNW Athena C18-W)，通用型的紫外检测器以及高压泵，含离子对试剂酸性流动相等度洗脱(pH＝5.0～6.0)，分别检测AMP和XMP的峰面积，用标准曲线方程计算出浓度并扣去空白，再根据公式计算得到IMPDH的酶活性值。/n
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