[发明专利]一种同时检测多种肝癌常见突变的ctDNA文库构建和测序数据分析方法

摘要

本发明公开了一种同时检测多种肝癌常见突变的ctDNA文库构建和测序数据分析方法。本发明建立的文库构建方法及测序数据分析方法具有以下优点：1、在不需要捕获的情况下同时检测肝癌多种突变形式；2、适合超小靶区的高效捕获；3、文库可以支持10‑20次检测；4、在文库构建过程中将DNA条码barcode连接到起始ctDNA分子上，配合生物信息分析流程，实现ctDNA低频突变的高特异性检测；5、文库可以同时用于PCR的热点检测和捕获法测序，加入的DNA barcode可以有效滤除假阳性突变，实现基于duplex高特异性测序。本发明对于肝癌的早期筛查、病情追踪、疗效评估、预后预测等具有重要临床意义。

主权项

1.一种测序文库构建方法，依次包括如下步骤：/n(1)将DNA样本依次进行末端修复和3’端加A处理；/n(2)将步骤(1)处理后的DNA样本与接头混合物连接，经过PCR扩增后得到文库；/n所述接头混合物由n个接头组成；/n每个接头均由一条上游引物甲和一条下游引物甲形成部分双链结构得到；上游引物甲中具有测序接头甲、随机标签、锚定序列甲和位于3’末端的碱基T；下游引物甲中具有锚定序列乙和测序接头乙；所述部分双链结构由上游引物中的锚定序列甲和下游引物中的锚定序列乙反向互补形成；/n所述测序接头甲和测序接头乙为为根据不同测序平台选择对应的测序接头；/n所述随机标签为8-14bp的随机碱基；/n所述锚定序列甲长度为14-20bp，连续重复碱基≤3个；/nn个接头采用n个不同的锚定序列甲，并且相同位置的碱基平衡，错配碱基数>3；/nn为≥8的任意自然数。/n