[发明专利]一种利用腺病毒载体构建小肠降表达胰岛素大鼠模型的方法

摘要

本发明公开了一种利用腺病毒载体构建小肠降表达胰岛素的大鼠模型的方法。主要包括腺病毒载体的构建，腺病毒载体转染大鼠小肠的方法。本发明利用腺病毒载体携带大鼠反义mRNA胰岛素基因，通过灌胃大鼠，三个月可以造成大鼠小肠胰岛素降表达，而且能造成该大鼠胰岛素耐量和口服糖耐量降低。这种动物模型，对于进一步开发治疗糖尿病的药物，具有广泛的应用前景。

主权项

1.一种利用腺病毒载体构建小肠降表达胰岛素大鼠模型的方法，其特征在于包括如下的步骤:（1）腺病毒载体的构建：大鼠小肠降表达胰岛素的腺病毒载体设计，共设计了两个含大鼠胰岛素反义mRNA载体；Ins1 Primer:Forward: cgGGATCCatggccctgttggtgcactReverse: cCGGAATTCTTAGTTGCAGTAGTTCTCCAGctgBamHI GGATCCEcoRI GAATTCIns2 Primer:Forward: CGGGATCCatggccctgtggatgcgReverse: CCGGAATTCctagttgcagtagttctccagc gaattccggBamHI GGATCCEcoRI GAATTC（2）腺病毒载体转染大鼠小肠的方法1）T2DM大鼠模型的建立：利用随机数字表法，在55只SPF级雄性SD大鼠中，随机取40只作为高脂组剩于15只为对照组；高脂组大鼠高脂喂养4周后，进行胰岛素耐量实验以确定是否诱导出胰岛素抵抗，当确定诱导出胰岛素抵抗之后尾静脉注射STZ（30mg/kg），3天后检测大鼠的随机血糖，随机血糖≥16.7mmol/L即为造模成功；2）将降表达Ins1和Ins2腺病毒载体灌胃给正常SD大鼠：从造模成功的大鼠中，挑选血糖、体重较为均一的大鼠进行实验，于注射STZ后第2周进行灌胃腺病毒操作，实验组灌胃抑制小肠分泌胰岛素的腺病毒载体，对照组灌胃空载体，将实验组与对照组灌胃后，以及实验组灌胃前后糖代谢状况进行比较分析；将降表达Ins1和Ins2腺病毒载体，给正常SD大鼠灌胃，同时加入抑制胃酸药物洛赛克，大鼠350g体重每次灌胃的药的剂量31ug，观察大鼠小肠胰岛素降表达模型的糖脂代谢变化。