[发明专利]一种愈伤组织阶段的筛选方法在审
| 申请号： | 201810734304.9 | 申请日： | 2018-07-05 |
| 公开（公告）号： | CN109022479A | 公开（公告）日： | 2018-12-18 |
| 发明（设计）人： | 刘佳音;米铁柱;张国栋;李继明;万吉丽;徐春莹 | 申请（专利权）人： | 青岛袁策集团有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/82 | 分类号： | C12N15/82;A01H5/00;A01H6/46;A01H4/00 |
| 代理公司： | 北京华仁联合知识产权代理有限公司 11588 | 代理人： | 李冰 |
| 地址： | 266000 山东省青岛市李*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | 本申请公开了一种愈伤组织阶段的筛选方法，以商业化的pCAMBIA1300双元载体质粒为模板，通过利用35S‑F 5′gggactctagaggatccTGGTGGC‑3′；35S‑R 5′AAGCTCCGAGGAGGTTTCCGGATA‑3′扩增获得35S启动子，获取两端含有Kpn I和X ba I酶切位点的35S启动子片段。本发明方法可以在植物转基因初期可以观察到转基因是否成功的一种快捷的报告基因检测方法，为后续的高效率的阳性植株筛选提供了依据。 | ||
| 搜索关键词： | 愈伤组织阶段 筛选 报告基因检测 双元载体质粒 植物转基因 酶切位点 阳性植株 高效率 转基因 扩增 观察 申请 成功 | ||
【主权项】：
1.一种愈伤组织阶段的筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：第一步，以含有DsRED片段的质粒为模板，利用引物进行扩增，获得DsRED片段；第二步，以双元载体质粒为模板，扩增获得两端含有Kpn I和X ba I酶切位点的35S启动子片段；第三步，将引入X ba I和BamH I酶切位点的DsRED片段插入到所述双元载体上；第四步，将引入Kpn I和X ba I酶切位点的35S启动子连接到第三步已经连接上DsRED基因的双元载体上；第五步，将含有35S启动子和DsRED基因的双元载体的融合质粒导入到农杆菌中，形成可以用于介导转化植物细胞的工程菌；第六步，利用上述工程菌转化水稻的愈伤组织；第七步，通过对第六步中转化的愈伤组织培养后，筛选转基因成功的细胞。
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