[发明专利]J亚群禽白血病病毒gp85基因重组原核表达蛋白及其纯化方法和应用在审
| 申请号： | 201810736332.4 | 申请日： | 2018-07-06 |
| 公开（公告）号： | CN109022470A | 公开（公告）日： | 2018-12-18 |
| 发明（设计）人： | 徐晴晴;王峰;沈志强 | 申请（专利权）人： | 山东省滨州畜牧兽医研究院 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C12N15/48;C07K14/15;C07K1/14;C07K1/34;C07K16/10;G01N33/569 |
| 代理公司： | 济南舜源专利事务所有限公司 37205 | 代理人： | 于晓晓 |
| 地址： | 256600 山东省滨州*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种J亚群禽白血病病毒gp85基因重组原核表达蛋白及其纯化方法和应用，包括下列步骤：（1）设计并合成扩增gp85基因的特异性引物（2）PCR扩增获得gp85基因片段并纯化；（3）将gp85基因克隆至pET‑32a原核表达载体，筛选阳性克隆后测序鉴定；（4）重组表达载体pET‑32a‑gp85的表达；（5）尿素法纯化表达的gp85蛋白；（6）重组gp85蛋白的复性。利用本发明的方法获得了高纯度的可溶性gp85蛋白。表达的蛋白可作为包被抗原建立抗体检测方法，还可用于免疫动物制备抗血清，为免疫荧光、免疫组化、胶体金检测卡制备等提供原材料。 | ||
| 搜索关键词： | 蛋白 重组原核表达蛋白 制备 胶体金检测卡 原核表达载体 重组表达载体 特异性引物 包被抗原 测序鉴定 抗体检测 免疫动物 免疫荧光 免疫组化 阳性克隆 高纯度 抗血清 尿素法 复性 可用 扩增 应用 合成 克隆 筛选 | ||
【主权项】：
1.一种J亚群禽白血病病毒gp85基因重组原核表达蛋白的纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）设计扩增gp85基因的特异性引物：ALV‑J‑F：5’‑ CG GGATCC GGAGTTCATCTGTTGCAACAACCAG‑3’ALV‑J‑R：5’‑ CCC AAGCTT TTA GCGCCTGCTACGGCGGTGAC‑3’；（2）PCR扩增获得gp85基因片段并纯化；（3）将gp85基因克隆至pET‑32a原核表达载体，筛选阳性克隆后测序鉴定；（4）重组表达载体pET‑32a‑gp85的表达；（5）尿素法纯化表达的gp85蛋白；（6）重组gp85蛋白的复性。
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