[发明专利]一种用于产气肠杆菌检测的实时荧光定量PCR试剂盒

摘要

本发明涉及一种用于产气肠杆菌检测的实时荧光定量PCR试剂盒，包括PCR反应液、酶混合液、产气肠杆菌Cad基因标准品、阴性对照品和阳性对照品。本发明通过提取产气肠杆菌的基因组DNA，结合实时荧光定量PCR检测技术，可达到准确定量待测标本中产气肠杆菌含量的目的，具有快速、灵敏、特异性好的特点，对判断产气肠杆菌活性菌的含量以及后续研究泌尿道感染具有重要意义。

主权项

1.一种用于产气肠杆菌检测的实时荧光定量PCR试剂盒，包括—PCR反应液，由12mM Tris‑HCl、100mM KCl、0.12%Triton X‑100、0.12% 胆酸钠、0.6 mg/mL BSA、1.8mM MgCl2、50nM dNTP、500nM上游引物、500nM下游引物、300nM Taqman探针组成；其中上游引物序列为5'‑CGCTGTACGCTTCATCTATT‑3'；下游引物序列为5'‑GACGCTGTATGCCGAGGTT‑3'；探针序列为5’‑TTCCCTTTGCCTAACATATCTACCGTTT‑3’；—酶混合液，由5U/µL Taq DNA聚合酶，50%甘油，20mM Tris‑HCl，100mM KCl，0.1mM EDTA，1mM DTT，0.5% Tween®20和0.5% NP‑40组成；—产气肠杆菌Cad基因标准品，由1.00×108copies/ml、1.00×107copies/ml、1.00×106copies/ml、1.00×105copies/ml的重组质粒组成；其中Cad基因标准品序列为5’‑CGCTGTACGCTTCATCTATTTTCCCTTTGCCTAACATATCTACCGTTTTTATCTGGTAGAAAATCGCCATATCTTTAATGCCGGGCATTTTACCTACTTTTTCAACCTCGGCATACAGCGTC‑3’；—阴性对照品，由水组成；—阳性对照品，由1.00×107copies/ml的重组质粒组成。