[发明专利]一种大豆HRM-SNP分子标记点标记方法及其应用

摘要

本发明属于基因工程技术领域，公开了一种大豆HRM‑SNP分子标记点标记及其应用，进行大豆SNP标记的开发、浙鲜九号基因组DNA提取、高分辨率熔解曲线过程与分析、浙鲜九号基于HRM技术的SNP分型、浙鲜九号HRM分型验证、浙鲜九号SNP指纹图谱的构建。本发明具有高通量、分析时间短：一次可同时完成对96个或384个样品的分析，适合大规模开发和检测SNP位点；本发明操作简便，无需序列特异性探针以及后续测序，只需要设计PCR引物，进行PCR反应，接着直接进行HRM，便可完成对样品的基因型分析；本发明特异性好：PCR产物无需后续处理，完全闭管操作。

主权项

1.一种大豆HRM‑SNP分子标记点标记方法，其特征在于，所述大豆HRM‑SNP分子标记点标记方法包括：大豆SNP标记的开发：使用数据库中的Genome浏览器工具从Williams 82物理图谱中每10Mb选择一个SNP标记，每条染色体选择4～6个SNP，均匀分布于大豆基因组20条染色体上,获取每个SNP标记的详细信息；大豆基因组DNA提取:根据改进的CTAB法提取大豆幼嫩叶片的基因组DNA，并稀释至25ng·μL‑1，保存于‑20℃冰箱以备后续HRM分析使用；高分辨率熔解曲线过程与分析：在定量PCR仪上进行PCR扩增和HRM分析；高分辨率熔解曲线分析采用480软件的Gene Scanning模块进行，获得更好的标准化熔解曲线；大豆基于HRM技术的SNP分型：大豆DNA在定量PCR仪内进行扩增和HRM分析；大豆HRM分型验证：随机对部分SNP标记的PCR产物进行Sanger测序，验证HRM分析的准确性；大豆SNP指纹图谱的构建：以Williams 82为对照，利用开发的101个SNP标记对菜用大豆进行HRM分型，并将分型结果按照染色体编号－物理图距从小到大的顺序依次列出。