[发明专利]一种标记苹果授粉后花粉管微丝细胞骨架的试剂盒及方法

摘要

本发明属于植物生物技术领域，涉及一种标记苹果授粉后花粉管微丝细胞骨架的试剂盒及方法。先提供一种标记苹果授粉后花粉管微丝细胞骨架的试剂盒，包括：花柱固定液试剂A，花柱洗涤液试剂B，微丝染料试剂C和胼胝质免疫荧光试剂D。再应用所述试剂盒标记微丝细胞骨架，步骤为：1)取授粉的花柱；2)用花柱固定液试剂A对花柱固定；3)用花柱洗涤液试剂B对花柱洗涤；4)用微丝染料试剂C和胼胝质免疫荧光试剂D的混合溶液对花柱染色；5)对花柱滴加抗荧光猝灭剂，在激光共聚焦显微镜下观察花柱中花粉管微丝细胞骨架。本发明所述试剂盒和方法实现了快速、灵敏、准确、简便地观察苹果花粉管内微丝骨架的结构与排列方式。

主权项

1.一种标记苹果授粉后花粉管微丝细胞骨架的试剂盒，其特征在于，包括：花柱固定液试剂A，花柱洗涤液试剂B，微丝染料试剂C和胼胝质免疫荧光试剂D；所述花柱固定液试剂A包括：多聚甲醛、EGTA、PIPES、MgCl₂和蔗糖；所述多聚甲醛的质量百分比为10％，EGTA的浓度配比为6mmol/L，PIPES的浓度配比为80mmol/L，MgCl₂的浓度配比为6mmol/L，蔗糖的质量百分比为18％；所述花柱固定液试剂A的溶剂为双蒸水；所述花柱洗涤液试剂B包括：Tris‑HCl、NaCl和Tween；每1L花柱洗涤液试剂B中包括：100mL的Tris‑HCl、7g的NaCl和20mL的Tween，所述Tris‑HCl的pH为7；所述花柱洗涤液试剂B的溶剂为双蒸水；所述微丝染料试剂C包括：NP‑40、Alex‑561‑鬼笔环肽、Tris‑HCl、NaCl和蔗糖；所述NP‑40的体积百分比为1％，所述Alex‑561‑鬼笔环肽浓度配比为200nmol/L，所述Tris‑HCl的浓度配比为100mmol/L，所述Tris‑HCl的pH为5.0，所述NaCl的浓度配比为300mmol/L，所述蔗糖的质量百分比为18％；所述微丝染料试剂C的溶剂为双蒸水；所述胼胝质免疫荧光试剂D包括：NP‑40、纤维素酶、果胶酶Y‑23、Tris‑HCl、NaCl、甘氨酸、一抗anti‑β‑1,3‑glucanase和二抗FITC‑anti‑mouse‑lgG；所述NP‑40的体积百分比为1％，所述纤维素酶的质量百分比为3.0％，所述果胶酶Y‑23的质量百分比为0.3％，所述Tris‑HCl的浓度配比为100mmol/L，所述Tris‑HCl的pH为5.0，所述NaCl的浓度配比为300mmol/L，所述甘氨酸的浓度配比为120mmol/L，所述一抗anti‑β‑1,3‑glucanase的体积比为1:300，所述二抗FITC‑anti‑mouse‑lgG的体积比为1:300；所述胼胝质免疫荧光试剂D的溶剂为双蒸水。