[发明专利]一种乳腺癌PDX构建方法

摘要

本发明公开了一种乳腺癌PDX构建方法，包括以下步骤：肿瘤组织样本的准备、免疫缺陷小鼠乳腺导管内注射接种以及免疫缺陷小鼠常规饲养与观察。本发明采用乳腺导管内注射的方法，可以将人源乳腺癌微组织块或乳腺癌原代细胞注射到免疫缺陷小鼠乳腺导管内，构建人乳腺癌原位PDX模型，更符合临床乳腺癌发生发展的实际，为人类更好的研究乳腺癌提供了便利。本方法也可以用于人源或者鼠源性细胞株乳腺导管内注射构建乳腺癌细胞株移植瘤模型。

主权项

1.一种乳腺癌PDX构建方法，其特征在于，包括以下步骤：/n1）肿瘤样本采集：手术中切取肿瘤边缘生长比较旺盛、无溃疡坏死的肿瘤组织，迅速装入含有组织保存液的离心管中，离心管装入冰包低温运输至实验室；/n2）肿瘤样本处理：在实验室生物安全柜内用0.4%的台盼蓝染液检测肿瘤组织活性，剔除没有活性的组织；然后将组织放入0.2%的碘伏溶液中浸泡30秒钟消毒，再用含有3%双抗的PBS溶液冲洗组织；将冲洗干净的肿瘤组织放入新的培养皿中，一边用 7号针头戳组织，一边用少量 PBS溶液冲洗，把组织戳成片状后，再用两把镊子拧、挤压组织，并在 PBS溶液中漂洗，然后收集液体，通过 300 目过滤网过滤；将过滤后的微组织块悬液收集进15ml离心管，1000转/分钟离心5分钟，弃去离心管内大部分的液体，留取少量培养基悬浮微组织块备用；/n3）小鼠接种：在SPF级动物房，选择成年雌性裸鼠或其他高度免疫缺陷雌性小鼠，麻醉后将小鼠仰卧位固定于手术板上，有毛小鼠需要将腹部毛发剃除干净，使第4对乳头完全暴露；0.5%碘伏消毒局部皮肤，借助解剖显微镜，用显微眼科剪将第4对乳头尖部平剪掉，暴露乳腺导管，用50ul平口Hamilton微量进样针（30G）吸取20μl混匀的微小组织块混悬液或者细胞悬液（约10万细胞/乳头），缓慢注射进乳腺导管内，0.5%碘伏棉签消毒创口；/n4）小鼠饲养与观察：将小鼠饲养在SPF级动物房IVC笼具中，常规饲养；每周观察两次荷瘤小鼠，用手感触乳腺质地，并用游标卡尺测量肿瘤大小，记录肿瘤生长曲线；/n5）病理和基因检测：当肿瘤体积长到1500mm