[发明专利]一种淡水砂梨组培苗试管内微嫁接的方法

摘要

本发明提供一种淡水砂梨组培苗试管内微嫁接的方法，包括：诱导培养步骤：带芽茎段为外植体接种到诱导培养基上培养形成无菌试管苗；继代增殖步骤：将无菌试管苗转接到增殖培养基上进行增殖获得的无根组培苗，以增殖的无根组培苗作为微嫁接的接穗；砧木培养步骤：将棠梨种子接种到种子萌发培养基上培养形成砧木；微嫁接步骤：将接穗削成楔形的基部插入砧木的切口中，获得微嫁接苗；炼苗移栽步骤：将嫁接苗炼苗后移栽于栽培基质中，移栽后在塑料拱棚内培养。本发明结合组织培养和嫁接技术，利用增殖的组培苗和实生棠梨苗进行微嫁接，省去了组培苗生根的诱导过程，简化了育苗的程序，缩短了育苗时间，提高了苗木的抗逆能力和丰产性能。

主权项

1.一种淡水砂梨组培苗试管内微嫁接的方法，其特征在于，包括：诱导培养步骤：将淡水砂梨外植体置于0.1％‑0.3％的升汞溶液消毒10‑16分钟，然后用无菌水冲洗5‑6次，经无菌滤纸吸干水分后，用接种刀切成带1‑3个顶芽和/或侧芽的长为0.5‑2cm的带芽茎段，将所述带芽茎段为外植体接种到已灭菌并凝固的诱导培养基上，将接种后的诱导培养基先暗培养5‑10天，再在光培养条件下诱导外植体茎段的顶芽或侧芽萌发，形成无菌试管苗；继代增殖步骤：在无菌条件下将诱导培养的高为2‑4cm的无菌试管苗用接种刀切下转接到已灭菌并凝固的增殖培养基上进行增殖，并进行光培养30‑40天，促无菌试管苗的侧芽或不定芽萌发获得丛生的无根组培苗，将无根组培苗在无菌条件下用接种刀切分为单株组培苗，选取高于1.5cm的单株组培苗转接到增殖培养基上，多次继代培养获得无根组培苗，经继代培养30‑40天后的无根组培苗作为微嫁接的接穗；砧木培养步骤：将后熟处理过的棠梨种子用缓慢流水冲洗30‑60分钟，晾干后用70％乙醇处理30s，无菌水冲洗3次后沥干，用0.1％‑0.3％升汞溶液消毒4‑8分钟，消毒结束用无菌水漂洗5‑6次，然后接种到已灭菌并凝固的种子萌发培养基上，将接种后的种子萌发培养基先暗培养5‑10天，然后在光培养条件下诱导种子萌发，形成无菌的棠梨幼苗，棠梨幼苗生长到第二片真叶形成时作为微嫁接的砧木；试管内微嫁接步骤：将锡纸裁成0.5cm×1.5cm的条形，经高压灭菌后备用；在无菌条件下，取出砧木将其截顶，留3‑4cm长的茎，将底部侧芽和叶片用镊子摘除，沿砧木茎段顶部纵切形成长度为0.4‑0.6cm的切口；选取高度为2‑5cm、粗度与砧木茎段相近的接穗，在接穗的顶部留2‑6片叶子，并将其基部削成长度为0.4‑0.6cm的楔形结构，将接穗的楔形基部插入砧木苗茎段的切口中，使切口密贴，砧木和接穗至少有一边的边缘对齐，用锡纸将嫁接口绑缚，获得微嫁接苗；并将微嫁接苗放入已灭菌并冷却至室温的盛有液体培养基的试管中，液体培养基占试管体积的1/4，液体培养基表面放入锡纸以固定嫁接苗使液体不没过嫁接苗的根茎部位，用无菌封口膜封住试管口，将微嫁接苗进行光培养促嫁接口愈合和幼苗生长；炼苗移栽步骤：将嫁接苗光培养15天后，当砧木根部开始生长，且接穗叶片呈正常叶色并有新叶生长时将试管置于自然光中炼苗10‑15天，再去除封口膜炼苗1天后，移栽于体积比为2:1的泥炭和珍珠岩混合物的栽培基质中，移栽后在封闭的塑料拱棚内保温保湿培养，一周后逐渐通风，直至去掉塑料拱棚。