[发明专利]一种免疫球蛋白含量检测试剂及其制备方法

摘要

本发明涉及一种免疫球蛋白含量检测试剂及其制备方法，其特征在于包括样品缓冲液、孵育缓冲液、上样缓冲液和免疫球蛋白检定缓冲液；具有灵敏度高、抗干扰能力强及经济实用等特点，可广泛应用于医药卫生及卫生防疫等领域，为深入的进行分子生物学，分子肿瘤学、细胞生物学、生物化学等学科的研究提供了有益的帮助。

主权项

1.本发明涉及一种免疫球蛋白含量检测试剂及其制备方法，其特征在于：包括样品缓冲液、孵育缓冲液、上样缓冲液和免疫球蛋白检定缓冲液；所述各组分按重量份配比为：所述样品缓冲液15‑25份，所述免疫球蛋白检定缓冲液15‑25份，所述孵育缓冲液40‑60份，所述孵育缓冲液25‑10份，所述上样缓冲液15‑25份；所述样品缓冲液由15mMNP‑40溶液、15mM钒酸钠溶液、15mMPBS溶液、15mM氟化钠溶液、15mM磷酸氢钾溶液、250mM盐酸溶液和40mM氯化钠溶液调配制成；以所述样品缓冲液为150重量份，所述15mMNP‑40溶液的含量比例优选15‑25重量份范围；所述15mM钒酸钠溶液的含量比例优选8‑25重量份范围；所述15mMPBS溶液的含量比例优选5‑15重量份范围；所述15mM氟化钠溶液的含量比例优选5‑15重量份范围；所述15mM磷酸氢钾溶液的含量比例优选25‑40重量份范围；用所述250mM的盐酸溶液的含量比例优选2‑8重量份范围；余下部分为所述40mM氯化钠溶液；所述孵育缓冲液由5mM氟化钠溶液、10mM甘油、10mM焦磷酸钠酶抑制剂、5mM亮肽酶素溶液、10mM蛋白酶抑制剂和10mM氯化钠溶液调配制成；以孵育缓冲液为100重量份，10mM氟化钠的含量比例优选2‑8重量份范围；20mM甘油的含量比例优选10‑35重量份范围；10mM焦磷酸钠酶抑制剂的含量比例优选1‑5重量份范围；30mM亮肽酶素溶液的含量比例优选1.5‑8重量份范围；15mM蛋白酶抑制剂的含量比例优选0.5‑2.5重量份范围；余下部分为10mM氯化钠溶液；所述上样缓冲液由25mM硝基苯酚溶液、15mMSDS溶液、次血红素和15mM氮化钠溶液调配制成；以所述上样缓冲液为150重量份，所述25mM硝基苯酚溶液的含量比例优选25‑35重量份范围；所述15mM SDS溶液的含量比例优选15‑45重量份范围；所述次血红素的含量比例优选0.2‑0.8重量份范围；余下部分为所述15mM氮化钠溶液。所述免疫球蛋白检定缓冲液由25mMTween‑80溶液、25mM氮化钠溶液、5mM氮化钠溶液、25mMPEG‑6000溶液和25mM氯化钾溶液调配制成；以所述蛋白质交联缓冲液为150重量份，所述25mMTween‑80溶液的含量比例优选15‑40重量份范围；所述25mM氮化钠溶液的含量比例优选2‑15重量份范围；所述5mM氮化钠溶液的含量比例优选5‑10重量份范围；所述25mMPEG‑6000溶液的含量比例优选2‑15重量份范围；余下部分为所述25mM氯化钾溶液；一种免疫球蛋白含量检测试剂的使用方法，如以下步骤所示：S1、测定5mM氯化钠溶液的吸光度为B1，将5mM氯化钠溶液和血清样本按照体积比50:1进行混合，混合均匀后在37℃孵育5min，测定其吸光度为A1，将5mM氯化钠溶液和已知免疫球蛋白的浓度的已测标准样品按照体积比50:1进行混合，混合均匀后在37℃孵育5min，测定其吸光度为A1'；S2、测定所述免疫球蛋白含量检测试剂的吸光度为B2，将5mM氯化钠溶液、所述免疫球蛋白含量检测试剂、血清样本按照体积比:20:5:1进行混合，混合均匀后在37℃孵育5min，测定其吸光度为A2，将5mM氯化钠溶液、所述免疫球蛋白含量检测试剂、已知免疫球蛋白的浓度的已测标准样品按照体积比20:5:1进行混合，混合均匀后在37℃孵育5min，测定其吸光度为A2'；S3、所述血清样本中所述免疫球蛋白含量，通过公式一计算：D＝ΔA/ΔAs*C其中：D为所述血清样本中所述免疫球蛋白的浓度；ΔA为以空白管吸光度为对照的样本管吸光度，通过公式二计算：ΔA＝(A2‑A1)‑(B2‑B1)ΔAs为以空白管吸光度为对照的已测标准样品吸光度，通过公式三计算：ΔAs＝(A2'‑A1')‑(B2‑B1)C为已测标准样品中免疫球蛋白的浓度。