[发明专利]一种快速测定乳粉中致病菌的方法在审
| 申请号： | 201810778691.6 | 申请日： | 2018-07-16 |
| 公开（公告）号： | CN108841977A | 公开（公告）日： | 2018-11-20 |
| 发明（设计）人： | 吴冰;蔡先全;郑传发;邱霞;张任广;吉宇恒 | 申请（专利权）人： | 中山出入境检验检疫局检验检疫技术中心 |
| 主分类号： | C12Q1/689 | 分类号： | C12Q1/689;C12Q1/6851;C12Q1/14;C12Q1/10;C12Q1/04;C12R1/42;C12R1/01;C12R1/445 |
| 代理公司： | 广州新诺专利商标事务所有限公司 44100 | 代理人： | 罗毅萍 |
| 地址： | 528400 广东省中*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种快速测定乳粉中致病菌的方法，其包括以下步骤：S1、通过煮沸法提取乳粉中的核酸模板；S2、寡核苷酸引物的合成：查询沙门氏菌、志贺氏菌、金黄色葡萄球菌的特异保守基因，以此为靶基因设计、合成寡核苷酸引物；S3、荧光定量PCR检测：将核酸模板加入装有相应寡核苷酸引物对的小管中，再分别加入相应的荧光定量PCR试剂进行检测；S4、检测分析：分析检测数据。本发明的检测方法能够同时对乳粉中的多种致病菌(沙门氏菌、志贺氏菌、金黄色葡萄球菌)进行定量测定，检测方便快捷，重现性高，灵敏度高，检测时间短，准确率为98.78％。 | ||
| 搜索关键词： | 乳粉 寡核苷酸引物 致病菌 沙门氏菌 金黄色葡萄球菌 检测 核酸模板 快速测定 志贺氏菌 荧光定量PCR检测 荧光定量PCR试剂 合成 分析检测数据 保守基因 定量测定 检测分析 煮沸 靶基因 灵敏度 重现性 准确率 小管 查询 | ||
【主权项】：
1.一种快速测定乳粉中致病菌的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、乳粉中核酸模板的提取：取25g待检乳粉加入营养肉汤中36℃培养24小时，取1mL培养液，加入到1.5mL无菌离心管中，6000‑8000r/min离心5‑10min，吸弃上清，加入50μLDNA提取液，混匀后沸水浴5‑10min，10000‑12000r/min离心5‑10min，取上清液作为核酸模板；S2、寡核苷酸引物的合成：查询沙门氏菌、志贺氏菌、金黄色葡萄球菌的特异保守基因，以此为靶基因设计、合成寡核苷酸引物；S3、荧光定量PCR检测：将步骤S1所得核酸模板分别加入装有步骤S2所得不同特异寡核苷酸引物对的小管中，再加入相应的荧光定量PCR试剂，在同一轮荧光定量PCR循环下，对乳粉中的沙门氏菌、志贺氏菌、金黄色葡萄球菌进行定量检测；S4、检测分析：分析检测数据。
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